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一种实验用小型哺乳动物牙齿透明化方法技术

萌宠菠菠乐园
2025-01-24 22:32

本发明专利技术提供一种实验用小型哺乳动物牙齿透明化方法，该透明化方法是先将实验用小型哺乳动物牙齿进行固定与脱钙处理，再经脱水处理

【技术实现步骤摘要】
一种实验用小型哺乳动物牙齿透明化方法

[0001]本专利技术属于实验用动物组织透明化
，涉及一种实验用小型哺乳动物牙齿透明化方法
。

技术介绍

[0002]当光无法穿透生物组织时，人肉眼当中此组织即为不透明的
。
动物组织内部含有水
、
脂肪
、
胶原纤维
、
蛋白质等折射率不同的成分，光在组织中发生散射，因而无法穿透组织，呈现出不透明的状态
。
通常来说，哺乳动物组织内含有的血红素
、
黑色素等吸收光的物质，也会使得光无法穿透
。
基于上述动物组织的不透明状态影响了光的传播，因此常用的石蜡切片厚度仅为3‑5μ
m
，冰冻切片厚度仅为6‑
10
μ
m。
菲薄的组织切片可以减少对于光传播路径的影响，从而使得光学显微镜
、
共聚焦显微镜等可以收集切片内部信息
。
传统
3D
成像技术是通过对组织进行切片，切片后分别成像，再将图像重建成一个整体实现的三维成像技术
。
这种流程所需时间
、
精力颇费，切片过程中组织变形明显，组织重建难度较大
。
[0003]而组织透明化技术通过物理或化学技术，去除吸光物质，调整组织内部折射率，使得折射率均匀，从而让光线能穿透组织，因此可以配合共聚焦显微镜及光片显微镜，实现组织或器官的整体成像
。
组织透明化技...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种实验用小型哺乳动物牙齿透明化方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)
固定与脱钙处理将解剖所得实验用小型哺乳动物牙齿，通过细胞固定液进行常规固定处理后，洗涤以去除细胞固定液，然后用质量百分比浓度为
10
～
25
％的
EDTA
脱钙溶液浸泡处理2～5天，每隔
20
～
28
小时更换一次
EDTA
脱钙溶液，洗涤以去除
EDTA
脱钙溶液，作为已脱钙的牙齿；
(2)
脱水处理将步骤
(1)
所得已脱钙的牙齿，采用组织脱水剂进行脱水处理，得到已脱水的牙齿；所述组织脱水剂为甲醇或异丙醇；
(3)
漂白处理将步骤
(2)
所得已脱水的牙齿，采用过氧化氢甲醇溶液进行漂白处理，然后再次采用组织脱水剂进行复水处理，得到已漂白的牙齿；
(4)
染色预处理将甘油
、Triton X
‑
100
和尿素添加入去离子水中混合均匀，配置得到抗原回收液；其中甘油
、Triton X
‑
100
和尿素的质量百分比浓度分别为
14
～
16
％
、5
～
10
％和
22
～
28
％；将驴血清
、
二甲基亚砜和
Triton X
‑
100
添加入
PBS
缓冲液中混合均匀，配置得到封闭缓冲液；其中驴血清
、
二甲基亚砜和
Triton X
‑
100
的质量百分比浓度分别为8～
10
％
、9
～
11
％和
0.4
～
0.6
％；将步骤
(3)
所得已漂白牙齿浸泡于抗原回收液中4～
16
小时，时间到达后，用添加有质量百分比浓度为2～3％胎牛血清的
PBS
缓冲液洗涤至少两次，以去除抗原回收液，然后浸泡于封闭缓冲液中
30
～
37℃
温度条件下孵育处理
20
～
60
分钟，作为已染色预处理的牙齿；
(5)
免疫荧光染色处理将驴血清
、
二甲基亚砜和
Triton X
‑
100
添加入
PBS
缓冲液中混合均匀，配置得到抗体稀释液；其中驴血清
、
二甲基亚砜和
Triton X
‑
100
的质量百分比浓度分别为
1.5
～2％
、9
～
11
％和
0.4
～
0.6
％；将驴血清和
Triton X
‑
100
添加入
PBS
缓冲液中混合均匀，配置得到冲洗缓冲液；其中驴血清和
Triton X
‑
100
的质量百分比浓度分别为
1.5
～2％和
0.4
～
0.6
％；当所需添加的抗体为共轭了荧光染料的抗体时：将抗体按照
1:(100
～
200)
的体积比例在抗体稀释液中稀释为抗体工作液，步骤
(4)
所得已染色预处...