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常见猪病检测方法

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2025-06-25 06:06

-1-猪病诊断技术规范一、致病性大肠杆菌的检测1引用标准参考NY/T555-2002(动物产品大肠杆菌、粪大肠菌群和大肠杆菌的检测方法)。2范围适用于猪大肠杆菌病的诊断。)将采集的肝、脾、心血或肠内容物等分别接种伊红美兰琼脂平板(同时接种营养肉汤增菌备用),置37℃培养18~24h。b)观察培养特性,挑取黑色有金属光泽的菌落,用该菌落涂片,革兰氏染色,镜检。c)如可见到两端钝圆并多以单个存在的革兰氏阴性粗短杆菌,应取5~10个典型菌落再接种于TSI琼脂。d)同时挑取典型菌落接种营养琼脂,37℃培养16~18h的菌液用于生化特性鉴定。,(36±1)℃培养24h后观察结果。:a),观察结果。-2-b)出现红色环的为反应阳性;出现黄色环的为反应阴性。(MR)试验a)-VP培养基中混合,观察结果。b)出现红色为阳性反应;出现黄色为阴性反应。)-VP培养基中混匀,,静置,观察结果。b)在15min内出现红色的为阳性反应;无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1h后再观察一次,出现红色也为阳性反应。:观察培养基颜色变化,出现蓝色为阳性反应;不变色为阴性反应。。表1大肠杆菌鉴定结果靛基质MRVP枸橼酸盐鉴定++--典型大肠埃希氏杆菌-+--非典型大肠埃希氏杆菌++-+典型柠檬酸盐杆菌-+-+非典型柠檬酸盐杆菌---+典型产气杆菌+--+非典型产气杆菌出现表1的生化反应类型时,如果为组织样品,由此可初步报告为致病性大肠杆菌。如果为粪便,尿液,饲料,饮水,应进一步做致病性试验。)取经营养肉汤37℃培养16~18h后的纯化菌株培养液,分别腹腔接种体重20g左右的小白鼠,每株接种2~3只,(含菌量约为1×1012cfu/mL),同时用相同数量的小白鼠接种无菌肉汤作对照。b)饲养观察、记录死亡数,并从死亡鼠的心、肝中回收接种菌。在24小时内出现死亡的可报告为致病性大肠杆菌。-3-4药敏试验a)挑选琼脂平板上典型菌落接种营养肉汤培养中,37℃培养16~18h,菌液用于药敏试验。b)将肉汤培养物(用标准比浊管比较达相同浊度)稀释至含菌量为1×109cfu/mL,摇匀后蘸取菌悬液均匀涂布于琼脂平板上,然后用无菌镊子将药敏片贴附其上,每纸片2~5张,置37℃培养24h后观察。c)根据抑菌圈大小来判定其对药物的耐受性,选择敏感药物。二、沙门氏菌的检测1引用标准参考NY/T550-2002(动物和动物产品沙门氏菌检测方法)。2范围适用于猪沙门氏菌病的诊断。(LD)-硝基酚-β-D-半乳糖苷(DNPG))采集疑似病例的肝、脾、心血或肠内容物样品。b)无菌剪取肝、脾样品1g,投入10mLSC增菌液中(血液、粪便样品可以采适量直接投入10mL增菌液),36±1℃培养18~24h。c)取一接种环增菌液划线接种于DHL琼脂平板上,36±1℃培养18~24h。观察平板上菌落生长形态。沙门氏菌在DHL平板上呈无色半透明,产硫化氢(H2S),菌落中心黑色或几乎全黑色。-4-)挑取DHL平板上可疑菌落3~5个,每个菌落先洗入TSI培养基冷凝水中,继而在斜面上划线接种并高层穿刺接种。b)再挑取同一菌落依次接种氨基酸脱羧酶发酵试验(LD)和ONPG,甘露醇糖发酵管三支生化管,若菌落偏小,二次挑取菌落有困难,可用接种环醮取TSI培养基中冷凝水接种其余生化管,36±1℃培养18~24h(挑取菌落后的平板,应置于4℃冰箱保留48h以备复查)。c)按表1记录反应结果,对照表2进行判定。d)凡符合表2生化反应模式,可报告为沙门氏菌。表1生化反应结果判定生化管TSILDONPGMAN底a斜面b硫化氢第一次颜色记录符合黄+黄+黑+紫+深黄+黄+第二次颜色记录符号红-红-无黑色-黄-无色或淡黄-紫-a“底”观察葡萄糖反应。b“斜面”观察乳糖和蔗糖反应。表2生化检测沙门氏菌属判定表序号TSILDONPGMAN判定底斜面硫化氢ABaCDbEcFdG++++++--+----+-++++---+++-+-+--++---++++++++-沙门氏菌亚种

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