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动物粪便检查

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2024-09-25 04:48

羊（其他反刍动物）除以上病原外产气荚膜梭菌B型（主要）、副结核杆菌（潜伏期很长，幼年感染到2-5岁表现为临床症状，主要表现为顽固性腹泻，排泄物稀薄，恶臭，带有气泡，黏液，血凝块）Table7.3Porcinediarrhea

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specimencollection扁桃体空肠回肠肠系膜淋巴结结肠袢整个盲肠或结肠防漏容器中一、直肠粪便收集法利用棉签收集粪便量一般都比较少，直接涂片检查。二、直接检查1、通过直肠收集到的粪便，取一点粪便放在载波片上，直接涂片后滴加一滴生理盐水，观察是否有原虫运动。显微镜暗视野可以观察短螺旋体运动（痢疾杆菌）（原虫，贾第虫，毛滴虫，毛滴虫可以引起牛不孕，家禽组织滴虫病(盲肠肝炎)仔猪群，2月龄，排黄色稀便，表面附有条状黏液。2天后粪便充满血液和黏液，恶臭，逐渐消瘦死亡，死亡前体温降至常温一下。118、该病最可能的诊断是（

）2019A、巴氏杆菌病

B、猪痢疾C、大肠杆菌病D、猪传染性胃肠炎E、猪流行性腹泻119、剖检的典型病变位于（）2019A、胃B、脾C、肾D、小肠

E、大肠120、用于该病的快速检测的方法是（）2019A、暗视野显微镜检查B、麦康凯琼脂分离C、空斑试验D、血凝试验E、平板凝集试验2、直接涂片染色法将通过直肠收集到粪便的棉签在干净的载玻片上轻轻的滚动，做涂片，等到风干后，进行Diff-Quik染色，可以观察，细菌的形态，杆菌、梭菌、弯杆菌，端螺旋体，同时观察是否有炎症细胞（中性粒细胞，或者其吞噬像），肠上皮细胞。2、直接涂片染色法

制作载波片，进行革兰氏染色观察细菌形态，区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。1、魏氏梭菌A型，C型，B型（羊）革兰氏染色阳性菌，革兰氏染色结果观察2、大肠杆菌、革兰氏阴性短杆菌

3、沙门氏菌，革兰氏阴性，短杆菌；4、胞内劳森菌革兰氏阴性菌检查有限三、实验室病原菌分离鉴定收集到的粪便样品直肠收集的棉拭子接种鲜血琼脂37度培养（厌氧/正常氧24小时）观察菌落特点革兰氏染色观察细菌形态1、魏氏梭菌A型，C型、B型（羊），革兰氏染色，阳性菌；2、大肠杆菌，革兰氏阴性，短杆菌；3、沙门氏菌，革兰氏阴性，短杆菌；4、胞内劳森菌，革兰氏阴性菌，弯曲状杆菌（不易培养）5、空肠弯曲菌（革兰氏阴性无芽孢杆菌，山羊很少发生，主要是绵羊、牛、鸡（肝损伤））6、螺旋体（痢疾杆菌）（一）致病菌常规鉴定1.革兰氏染色(GramStain)2.KOH试验（KOHTest）3.氧化酶试验（OxidaseTest)1、革兰氏染色(GramStain)

1）染色原理

StructureofaGram-NegativeCellWallStructureofaGram-PositiveCellWall

Crystalviolet,theprimarystain,bindstobacterialwallaftertreatmentofbacteriawithasolutionofiodine.（结晶紫初染后结合到细菌的细胞壁上，然后碘液复染。）ThegroupofbacteriacalledGrampositiveretainsthecrystalvioletevenaftertreatmentwithadecolorizer,suchasalcohol-acetone.（G+在乙醇脱色后，结晶紫仍然在细胞内，呈现蓝紫色）TheGramnegativebacteriadonotretainthecrystalvioletstain,whichiseasilyremovedbythedecolorizer.Thensafranin,thesecondarystain,willstainGramnegativebacteriapinkorred.（G-在乙醇脱色后，结晶紫从细胞内释放出来，然后再用复红复染，呈现粉红色或者红色。革兰氏染色过程所用四种不同溶液的作用：

（1）碱性染料

草酸铵结晶紫液。（2）媒染剂

碘液，其作用是增强染料与菌体的亲和力，加强染料与细胞的结合。（3）脱色剂

乙醇使被染色的细胞脱色。利用不同细菌对染料脱色难易程度不同，而加以区分。（4）复染液

复红溶液，目的是使脱色的细菌重新染上另一种颜色，以便与未脱色菌进行比较。2）实验材料载玻片，标记笔，接种环；结晶紫，碘液，乙醇，复红（番红）；吸水纸，镜油，显微镜。

2）细菌标本片的制备

（1）载玻片的准备

取清洁载玻片，用擦镜纸擦干净，如有油迹或污垢，用少量酒精擦拭。通过火焰2～3次，以便除去残余油迹。将干燥好的抹片涂面朝上，在酒精灯火焰上通过数次（5-6次），略作加热（但不能太热，以手背触及玻片微烫手为度）进行固定。

固定目的：a.杀死细菌；b.使菌体蛋白凝固附着在玻片上，以防被水冲洗掉；c.改变细菌对染料通透性，因活细菌一般不允许染料进入细菌体内。3）固定

4）革兰氏染色步骤水洗干燥镜检（100Ｘ油镜）涂片滴水取菌固定结晶紫染色（1-2min）水洗碘液(1-2min)95%乙醇脱色（20-30S）番红(0.5min)水洗(!无菌操作)干燥水洗①染色：在已干燥固定好的涂片上滴加草酸结晶紫溶液于涂面上，染色1～2min，水洗。②媒染：滴加革兰氏碘液作用1～2min，水洗。③脱色：滴加95％酒精于涂片上，脱色时间根据涂抹面的厚度灵活掌握，多在20～30s之间，水洗。④复染：加复红溶液数滴，染色0.5min，水洗。⑤吸干或自然干燥。⑥镜检：

G+呈蓝紫色，G-为红色。5）结果2、KOH试验（KOHTest）1）试验原理Gram-negativebacteriacellwallsarelysedwhenmixedwitha3%aqueoussolutionofPotassiumhydroxide(KOH),chromosomalDNAisthenliberatedandthesuspensionbecomesviscid.(革兰氏阴性菌与3%氢氧化钾的水溶液混合细胞壁发生裂解，染色质DNA释放出来，液体就变得粘稠。)Gram-positivebacteriacellsdonotlyseandthusdonotresultinaviscidmixture.(G+与3%氢氧化钾不会溶解，不会产生粘稠现象。)ResultsfromthistesthavecorrelatedcloselywithGram-stainingresults.(与革兰氏染色共同鉴定细菌是G+还是G-。)2）实验材料

载玻片，金属环，3%氢氧化钾溶液3）实验步骤（Procedure）（1）Placeonedropof3%KOHonaglassslide.（放一滴3%KOH到载玻片上）（2）Transferoneormorebacteriacoloniesfromthesurfaceofsolidmediumintothesolutionontheslide.（从培养基上取一个菌落或者更多的细菌菌落到载玻片上）（3）Mixandpullawaytheloopslowlywithin60seconds.（与氢氧化钾溶液混匀，在1分钟内用金属环拉，看是否有粘稠丝线产生）4）实验结果（Interpretation）Grampositivebacteria:mixtureremainsfluid.Gramnegativebacteria:mixturebecomesviscidorgels.（G+：混合物仍是流体状；G-：混合物呈半流体状或胶体状）学生的实验结果根据革兰氏染色和KOH实验结果初步认为：1、该病原菌为革兰氏阴性菌；2、单个细菌为杆状；3、氧化酶试验（OxidaseTest)1）试验原理TheOxidaseTestisarapidproceduretodeterminethepresenceoftheenzymecytochrome-coxidaseandisusedtodifferentiateGram-negativebacteria.（氧化酶试验是一种快速测定细胞色素C的方法，可用于革兰氏阴性菌鉴定。）OrganismsofthefamilyEnterobactereaceaareoxidasenegative.Gram-negativebacteriathatareoxidasepositiveincludegenusPseudomonas,Pasteurella,Mannhemiahaemolytica,etc.（肠杆菌群属呈氧化酶试验阴性。假单胞菌属、巴氏杆菌属、溶血性甘露菌属等革兰氏阳性细菌氧化酶试验呈阳性。）2）实验材料

滤纸，棉棒或金属环，1%四甲基苯二胺盐酸盐3）实验步骤（Procedure）（1）Breakampouleinsidetheoxidasedropper.Moisterfilterpaperwithafewdropsofreagent.（打开内有氧化酶滴液安瓿瓶，滴几滴试剂湿润滤纸。）（2）Removeawell-isolatedcolonywithasterilelooporwoodenapplicatorstickandsmearontothemoistenedfilterpaper.（用无菌环或棉棒取单个菌落并涂抹在湿润的滤纸上。）（3）Observeforcolorreaction.（观察颜色反应。）4）实验结果（Interpretation）Negativereaction:nocolordevelopmentoralightpinkcolor.Positivereaction:developmentofadarkpurplecolorwithin10to30seconds.（阴性：无色或淡粉色；

阳性：10s-30s内呈现深紫色）大肠杆菌氧化酶实验阴性氧化酶实验阳性通过，氢氧化钾实验，革兰氏染色、氧化酶实验，确定为革兰氏阴性菌。使用鉴定培养基进行培养，鉴定大肠杆菌，在伊红美兰培养基上，在麦康凯培养基上生长特性。确定是否是大肠杆菌。利用培养特性鉴定细菌，特殊性培养观察菌落独特性，达到对细菌的鉴定。（二）特殊培养鉴定大肠杆菌在麦康凯培养基上形成红色菌落某断奶后1周仔猪群，其中部分仔猪突然倒地惊厥，出现眼睑肿胀，大部分仔猪在1-7天内多数死亡。166、本病可初步诊断为（）2013A、猪链球菌病

B、猪水肿病C、副猪嗜血杆菌病

D、破伤风E、李氏杆菌病167、麦康凯培养基分离病原，挑选的菌落染色是（）2013A、白色B、黄色C、灰色

D、红色E、黑色168、进一步检查，具诊断意义的的病理变化应是（）2013A、胃壁和肠系膜水肿B、小肠粘膜水肿C、胃黏膜出血D、回盲肠扣状溃疡E、回肠增厚137、某猪场刚断奶仔猪突然出现神经症，眼睑及周围皮肤水肿。剖检病猪可见胃壁和肠系膜明显水肿。该病可能是（）2012A、猪痢疾B、仔猪低血糖症C、仔猪副伤寒D、仔猪大肠杆菌病E、仔猪营养性贫血。大肠杆菌在伊红美兰培养基上产生黑色带金属光泽的菌落其他细菌，利用商业化的生化检测试剂盒检查。药敏试验：用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test法），和自动化仪器等。四、药敏实验纸片扩散法：该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。

同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度。（一）药敏实验操作

在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌（涂棒）的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上；液体菌液，用灭菌过