脑声常谈丨小鼠行为味觉反应测试实验方法②：双瓶饮水选择实验之短期双瓶饮水测试
双瓶饮水选择实验
双瓶饮水选择实验是一种简单且具有成本效益的程序，用于比较测试味觉剂的摄入量与对照液体的摄入量。短期双瓶饮水测试（<5 分钟）比长期双瓶饮水测试（>5 分钟）更能反映味觉敏感性，后者涉及味觉和摄入后饱腹感线索，也调节进食行为。然而，在长期的双瓶饮水实验中，摄入后线索对喂养行为（例如液体摄入）的贡献可以通过利用肠道中相对惰性的味觉剂（包括人造甜味剂，如糖精和人造甜味化合物SC45647）来最小化。
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短期双瓶饮水测试，在第一天向小鼠提供5分钟的一瓶水和一瓶味觉剂，并在第二天切换瓶子的位置以考虑单侧偏好。小鼠在每次测试前进行过夜水剥夺，以激励它们在短时间内喝水。在48小时的长期双瓶饮水测试中，连续48小时向小鼠提供一瓶水和一瓶味觉剂，瓶子的位置在24小时后切换。
（一）.短期双瓶饮水测试
1．实验材料
a．家笼中的小鼠受试者
b．去离子水
c．溶于去离子水中的味觉剂溶液
d．25毫升刻度为0.2 ml的塑料血清移液管
e．精细手锯刀片或类似产品
f．硅胶管（内径 7.94 mm，外径 12.8 mm）
g．剪刀或锋利的切割工具
h．不锈钢吸管（≥45 mm长，外径 7.94 mm，孔径约2–3 mm）
i．橡胶塞（000号）
2．制作饮水瓶
（1）．对于要测试的每只小鼠，准备两个25 ml 塑料移液管，用手锯切断两端。
（2）．对于每个移液管，用剪刀或锋利的切割工具切割 1.5 至 2 cm长的硅胶管。
（3）．将吸管的较宽一侧插入一块硅胶管中，然后插入每个 25 ml 移液管的末端。
注意：组装好的水瓶如图1所示。一旦瓶子装满所需的溶液，就会插入橡胶塞。吸管的尺寸对于获得准确的结果非常重要。如果孔太小，小鼠难以饮用粘性液体（例如油），并且较大的孔容易溢出。该设计改编自Bachmanov等人于1996和2002年发表的文章和Monell小鼠味觉表型项目（https://www.monell.org/MMTPP/）。
图1．组装好的饮水瓶3．实验程序
A．第 0 天：开始限制饮水
（4）．在第一天训练之前约 22-23个小时开始水剥夺，移走水瓶。
B．第1 天：开始饮水训练
（5）．给饮水瓶贴上标签。将一个装满水，另一个水瓶是空的。
（6）．将橡胶塞插入每个瓶子的顶端。
（7）．排气泡：用手指在吸管孔上轻轻摇动饮水瓶，直到没有气泡向上移动。
（8）．测量水瓶中的液体体积。
（9）．将一个水瓶和一个空瓶放在每只小鼠的家笼中，间隔 1.5 到 3 cm。对于多个测试/笼子，随机化两个瓶子的左/右位置。
（10）．在5分钟结束时，测量液体摄入量（即液体体积的变化）。
（11）．训练结束后，随意让小鼠获得水，直到下一次测试的禁水期开始（例如，如果小鼠处于 22 小时的限水状态，则给予 2 小时饮水）。
C．第2-3 天：完成饮水训练
（12）．连续几天重复步骤（5）-（11），直到所有动物在5分钟的训练中可靠地消耗至少3毫升水，切换瓶子的左/右位置。
注意：至少需要两天的训练，如果动物在每次训练期间表现不可靠，则可能需要额外的训练日。
D．第4-5 天：进行口味偏好测试
（13）．给瓶子贴上标签。一个瓶子装味觉剂，另一个加水。
（14）．用上述同样的方法去除气泡。
（15）．测量每个瓶子中的液体体积。
（16）．将两个瓶子放在小鼠的家笼中，间隔1.5至3 cm。随机化两个瓶子的左/右位置。
（17）．在5分钟测试结束时，测量液体摄入量。
（18）．训练结束后，随意让小鼠获得水，直到下一次测试的禁水期开始。
（19）．第二天，重复步骤（13）-（18），切换瓶子的左/右位置。
注意：相同的味觉剂、不同浓度的相同味觉剂或不同的味觉剂，都可以在接下来的几天内再次测试。
图2．短期双瓶饮水测试方案4．数据分析
使用以下一个或两个选项绘制结果图表：
A．以毫升为单位绘制水和味觉剂的平均液体摄入量（图3A).
B．将平均味觉剂摄入量（Vt） 标准化为饮水量 （VW），给出偏好分数（图3B):
Preference score (%) = Vt / (Vt+ VW) ×100
注意：第一种方法提供了所有行为数据的可视化，如果实验组之间的消耗水量不同，则可能有用。偏好分数图是呈现数据的理想方式，因为它可以立即显示味觉剂是否优于水。偏好得分大于50% 表示动物优先选择味觉剂，偏好得分小于50% 表示动物首选水。
图3．双瓶饮水选择偏好数据的图形表示。（A）水和味觉剂的平均液体摄入量。（B）将味觉剂摄入量标准化为饮水量（偏好评分）下期预告：双瓶饮水选择实验之长期双瓶饮水测试
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