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犬人工授精的步骤和关键技术问题

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2024-08-15 10:32

器具的准备以及用途
1，电器类：
   恒温培养箱：放置人工授精器具（采精杯、移液器、开膣器、膣镜灯、输精枪、输精针、输精器、血球计数板、盖玻片等），使其预热至36~38度。
   恒温水浴锅：隔杯存放精液，水温保持在36~38度。
   冷藏冰箱：0~5度保存稀释后的精液（家用冰箱冷藏室），也可用于保存当天多余的精液次日使用。
   显微镜：用于精液检验和脱落角化细胞检查
   消毒灭菌柜：消毒玻璃、金属器具。
   干燥箱：玻璃、金属器具的消毒烘干。
2，输精器械：输精针、输精枪、细管、开膣器、膣镜灯（当天受精母狗应每只一套）
3，采精器械：采精杯、一次性采精手套；
4，其他器械：母犬发情鉴定仪、量筒、量杯、移液器、血球计数板、垃圾桶。

犬的人工授精是指用人工的方法，将公犬的精液采取出来，通过严格的科学检查处理，用鲜精液或冷冻精液，输入到母犬的生殖器官内，使精子与卵子结合，达到繁殖优良犬的目的。

一、采精

1 ．采精的准备工作

（ 1 ）场地的准备为了保证公犬有一个良好的性欲反射条件，必须选好采精的场地。采精场应宽敞、安静、清洁，并要*消毒。

采精保定架宽65cm，长145cm，高120cm，架内固定铁管长80cm。前段上方固定横板，分为左右两扇，右侧扇固定，左侧扇可张开又合并，中间有1圆孔，直径12~18cm（根据犬的脖子粗细而定），用以卡住犬颈部，这时可进行采精。

采精杯收集犬的精液采用采精杯，有保温的作用。采精前对采精杯要认真清洗，恒温消毒柜消毒15~20分钟。然后把消毒好的采精杯放在恒温40度水浴锅中，以便采精时采精杯不凉，采下的精子不受冷打击。使用时不能直接将精液采入杯中。将两层采精袋装入保温杯内，并用洁净的玻璃棒使其贴靠在保温杯壁上，袋口翻向保温杯外，上盖一层过滤网，用橡皮筋固定，并使过滤网中部下陷3厘米，以避免犬射精过快或精液过滤慢时，精液外溢。安装好后，将其放恒温水浴锅中在38℃温度下预温10分钟。采精前应将集精杯、消毒纸巾、一次性手套放入恒温消毒柜中，以方便采精时取用。
（ 2 ）精液品质检查用品准备先将1600倍显微镜调好备用，把恒温载物态放在显微镜载物台上，用标本夹固定好，打开电热板控制器电源开关，把设定温度调到38℃再打到测温状态，准备好两张洁净的血球计数板和两张洁净的盖玻片放在加热板上预温。将电子秤、密度测定等用品准备好。

（ 3 ）采精员的准备采精员应穿上工作服，将犬赶入采精室后，清扫犬体后，应尽快双手戴上双层无毒的一次性手套，带上纸巾、集精杯、小凳准备采精。

（ 4 ）公犬的调教犬是经过人类*的饲养驯化来的，生理特点和公犬的品种性格的不同以及因个体不同，调教的效果也很不*。有的公犬性欲较强，性格温顺，能很快适应人工采精，而有部分公犬胆怯、性欲差，则需较长时间耐心地调教。在调教过程中，要有耐心，切勿粗暴地对待，否则种公犬形成恐惧心理，更加剧了调教的困难，甚至造成人、犬的伤害。开始调教时，应选择发情旺盛、性情温驯、与公犬体格相适应的发情母犬作为“台犬”。待公犬爬上台犬后，操作人员按摩其睾丸及阴茎，使阴茎勃起，这样经数次调教即能适应人工采精操作。待种公犬习惯于人工采精，并建立了条件反射后，不再以母犬作台犬。可直接进行采精。

（ 5 ）台犬的准备目前多采用发情的母犬作为台犬。采精前台犬的后躯、尾根部、外阴部、肛门部位，都应*洗涤清洁，再用消毒过的干抹布擦干。

2 ．采精技术

（ 1 ）手握法保定者先将犬脖子套住，放在保定架上，犬颈部用活页板孔卡住。采精者左手把住后躯尾部，右手用0.1%的高锰酸钾42度温水洗后，当公犬爬跨，阴茎勃起时，采精人员一只手抓住龟头的球状部位之后，上下按摩几次，当阴茎勃起后，即发现有透明的液体（副性腺）射出。当*部分副性腺射完后，另一只手拿着容器对准阴茎收集精液。这是握阴茎的右手要稍微用力按摩阴经，当*部分副性腺射出3ml后，*部分精液射出，约5秒，第二部分精液射出。在收集精液时，要特别注意器具不能触及龟头，否则会造成射精停止。另外，采精手应在龟头的背部必须保持一定的压力，但是右手不要压住阴茎下面的输精管。应注意的是只要精液，尽量少要副性腺，较大型犬1次射精量1.5~2ml，小型犬1次射精量不足1ml。

（ 2 ）假阴道采精法首先应根据公犬的阴茎大小制作阴道，其结构主要由外壳、内胎、采精杯及附件组成。在应用时先在假阴道内胎中装上热水，其温度应保持 40℃。假阴道内表面不必润滑剂，因为发情母犬阴道略显干燥。当公犬爬跨母犬时，将阴茎导入假阴道内、也可以用手淫的方法，待阴茎勃起时，推进阴道，另一只手持阴茎，助手轻轻地打气，使假阴道产生一定的压力，以便刺激公犬继续射精。

（ 3 ）采精频度采精频度对于公犬的性欲、采精量及精液品质均有较大的影响。如果在24h内采精3次，精子浓度即会降低、精子存活时间明显缩短。连续5天每日采精2次，畸形精子数会大大增加。因此公犬适宜的采精频度应该是1周采精2～3次。

二、精液品质检查

1 .精液量

各种犬的射精量，因其个体、年龄、采精方法、采精频率和营养状况等多种因素影响。射精量太多，可能是由于过多的副性腺泌物或其他异物混入，若过少可能是由于采精方法不当或生殖官功能衰退所致。发现这种情况就应该改进采精技术和方法，改进公大饲养管理或调整采精频率。

2 ．精液的色译大正常的精液为乳白色或灰白色，精子数量越多，乳白色越深。若精液呈淡绿色是混有浓液，呈淡红色是其中混有血液，呈黄色是混有尿液，凡属上述颜色的异常精液，应该丢弃或停止采精。

3 ．精子活率

是指精液中有改线前进运动的精子百分率，是评定精液品质优劣的重要指标之一，也称精子活力。检查方法是在血球计数板上放1滴精液，用盖玻片压上，制成压片置于1600倍的显微镜下观察。精子活率一般采用10级评分，即按精子直线前进运动的百分比评为10个等级： 100 ％前进者为 1 . 0 分，90 %前进的为0.9分，以下类推。
同时观察直线活动的精子顶体部分完整，因为即便是精子活力够，如果精子顶体部分已经没有了，那么受精率一样很低。（补充：只有1600倍以上的显微镜下才能看清精子顶体部分是否完好，这一点对于授精率和成胎率很重要）

4 ．精子密度

是指精液的单位容积（1mL）内所含精子数目，是评定精液品质的一项重要指标，也称精子浓度。目前测定精子密度的方法主要采用估测法、血细胞计算器计算法。

（ l ）估测法此法通常与检查精子活率（不做稀释）同时进行，在显微镜下根据精子分布稠密程度粗略地分为“密”、“中”、“稀” 3 级。

① 密整个视野充满精子，精子之间的空隙小于 l 个精子，看不见精子的活动情况，这种精液每毫升含有精子 10 亿以上。

② 中精子在视野中比较分散，精子与精子之间的空隙约与精子本身长度相等，可以分清精子活动情况，这种精液每毫升含精子 3~10 亿。

③ 稀在视野中只能见到少数精子，精子之间的空隙很大，这种精液每毫升含精子在 2 亿以下。

（ 2 ）计算法用血细胞计算器，在显微镜下计数，是比较准确的方法是先用血细胞吸管稀释精液之后将精液稀释20 倍时，用血红细胞吸管稀释：把精液稀释成 200 倍时，则用血红细胞吸管稀释。稀释液用 3 ％的氯化钠溶液，以杀死精子便于计算，其计数方法与血细胞计数相同。

5 ．精子的畸形率

是指形状不正常的精子。畸形情子种类很多，如头部巨大、瘦小、细长、圆形、轮廓不清、皱缩、缺损、双头等，颈部膨大、纤细、屈折、双体等，主段弯曲、屈折、回旋、短小、长大、缺陷、带原生质滴、双尾等，精液中的畸形精子的比率越高，受孕率就越低。一般认为，犬精子畸形率不得超过 20%。

6 ．精子的存活时间及存活指数

是指离体精子在一定条件下的寿命，这是判断精子受精能力的一项指标。将精液采出后，应立即稀释1: 2 ~3 倍，将稀释精液置于一定的温度（0℃~37℃ ）下，间隔一定时间检查精子活率，直至无活动精子为止，所需的总小时数为存活时间；两相邻2次检查的平均活率（即 2 次活率相加÷2 ）与间隔时间的积相加总和为生存指数。精子的存活时间越长，指数越大，说明精子活力越强，品质也越好，受精率也越高。

7. pH 值的侧定
测定的方法是用*试纸比色或电动比色来侧定，犬的精液ph值平均为 6 . 4 （ 6 . 1~7 . 0 ） , pH 值的高低与副性腺分泌物有关，*部分精液 pH 值居中、第二部分精液的 pH 值zui低；第三部分精液的 pH 值zui。pH值偏低的品质较好， pH值偏高的精子活力、受精力都显著降低。

三、精液的稀释

精液稀释的目的在于增加精液的容量，扩大配种头数。主要采用专业用于以扩大精液容量，北京田园奥瑞生物科技有限公司的犬人工授精稀释液。
其成分有：稀释剂、营养剂、葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、鲜奶、奶制品、卵黄、保护缓冲剂、柠檬酸钠、酒石酸钾、钠、磷酸二氢钾、只羟甲基氨基甲烷、碱性缓冲液、非电解物质、糖类、氨基乙酸、抗菌物质、青霉素、链霉索、卡那霉素、林肯霉素、多黏菌素、氯霉素、抗冻物质、二甲基亚飒、添加剂、酶类、过氧化氢酶β一淀粉酶、激素、缩宫类素，前列腺素 E 型、维生素类、维生素 B1、维生素B2、维生素B12、维生素 C 、维生素 E 、二氧化碳、乙酸、乙二铵四乙酸、乙烯二醉、亚蹄酸钾、聚乙烯吡咯烷酮、ATP 、精氨酸、*、冬眠灵等。

稀释倍数，一般根据原精液的密度来决定，通常犬精液可稀释 l~3 倍。

五、精液的保存

精液的保存方法，可分为常温（ 15 ℃ 一 25 ℃ ）．低温（ 0 ℃ ~5 ℃ ）和冷冻？（-79 ℃~-l96％ ℃ ）

1．常温保存法

主要是利用一定范围的酸性环境抑制精子的活动，以减少其能全的消耗。采用犬稀释液稀释，保存 4 天，精子仍其有活力。

2 ．冷冻保存法

利用-196℃的液氮、干冰-79℃ 或其他制冷设备作为冷冻源，将精液经过特殊处理后，保存在超低温下，以达到*保存的目的。主要为塑料细管保存。

六、输精

输精是指用输精器把精液愉送到母犬的生殖道内，使母犬达到受精的方法。

1．母犬的准备

将发情母犬保定后，尾巴拉向一边，将阴门及附近用温肥皂水擦洗干净，并用消毒液进行消毒，而后再用生理盐水冲洗，之后擦干净。

2. 确定*配种时间

若能在母犬的排卵时间予以配种的话，则能收到*的妊娠效果。通过观察母犬阴道黏膜的颜色的变化和阴道细胞学检查法，间接确定母犬排卵时间。

3 ．输精器的准备：犬的输精器和膣镜灯设备都要使用前应*消毒。

4. 精液的准备

新采取的精液，经稀释后应进行品质检查，然后进行输精。保存的精液，需要升温到 35 ℃ 左右，经过1600倍专业显微镜检后合乎标准时，方可用来输精。

5 ．输精方法

母犬的阴道向后下方倾，与脊柱呈45°，在人工输精时要注意这一生理特点。将母犬站立保定，使膣镜灯沿着背线方向缓慢地旋转插入阴道7~10cm深，通过膣镜灯灯体插入输精器，于子宫颈口的位置，慢慢注人精液，输完精后，母犬的后躯抬高片刻，而且用右手按摩几分钟阴道口外部，刺激母犬子宫收缩，便于子宫内精子的运行，以防止精液流出。隔日进行第2次输精。

6. 母犬受孕：zui简单的方法可以使用的受孕仪测试母犬是否受孕。

结果与分析：
2005年8月10日~2008年8月10日输精380只，准胎353只，准胎率92.9%；产仔1765只，成活1726只，成活率97.8只；窝均产5只，窝均成活仔4.9只，窝产仔zui多产9只，zui少产2只。结果证明，采取人工授精这一技术是切实可行的。适用于规模生产杂交犬，能大幅度提高经济效益。体型较大的犬与体型较小犬的自然交配很困难，因此，大量生产杂交犬要靠人工授精技术。

讨论与小结

1 具有很高的经济效益

犬人工输精节省种公犬，降低饲养成本。经试验用本交配种，公母比例为1∶5，用人工输精公母比例为1∶80～100，可提高16倍。而我们在门诊，接触的大部分为宠物犬，且多为家里只有一条母犬，缺乏优良的种公犬。因此，更加提高了种公犬的利用率，在今后的发展应该向冻精授精发展。

2 提高人工授精的受胎率，种公犬饲养管理条件要求较高，必须喂给全价饲料，做好疾病的预防和良好的卫生条件，才能保证种公犬健康和取得良好的精液品质。

3 在犬的自然交配过程中，犬的阴茎海绵体充塞阴道，公犬阴茎根部的球状海绵体膨大，使公母犬尾对尾地“锁结”在一起。每次交配一般持续10～20分钟，使射出精液流向子宫颈进入子宫，避免精液倒流。在人工授精中我们提高后躯，用手堵住阴道口外部，按摩几分钟，就是起到使精子充分的进入子宫角的作用。

4 在人工输精过程中，应严格按照操作规程做好采精、精液品质的检查、精液的稀释和输精每个环节，才能获得较好的效果，提高受胎率。

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