首页 > 分享 > 圈养和宠物爬行动物中的非结核分枝杆菌,Acta Veterinaria Brno

圈养和宠物爬行动物中的非结核分枝杆菌,Acta Veterinaria Brno

萌宠菠菠乐园
2024-12-06 06:51

圈养和宠物爬行动物中的非结核分枝杆菌
Acta Veterinaria Brno Pub Date : 2017-01-01 , DOI: 10.2754/avb201786010101
Irena Reil , Silvio Špičić , Gordan Kompes , Sanja Duvnjak , Maja Zdelar-Tuk , Dora Stojević , Željko Cvetnić

本研究的目的是强调非结核分枝杆菌物种在各种爬行动物宠物物种的病理学中的重要性，以及它们对人类感染传播的流行病学意义。在 2003 年至 2015 年期间，来自六只活爬行动物和来自十具尸体的器官的粪便样本进行了细菌学测试。来自一个粪便样本和两个器官的阳性菌落显示存在编码所有分枝杆菌常见的 65kDa 抗原的基因。对物种水平的进一步鉴定表明，这些分离物属于偶然分枝杆菌和鸟分枝杆菌亚种。hominissuis，后来进行了药物敏感性测试，证实了两种分离株的高耐药水平。综上所述，圈养和宠物爬行动物中非结核分枝杆菌的发生具有重要意义，将爬行动物作为可能的宿主，代表高耐药分枝杆菌分离株向人类传播的严重威胁。据我们所知，这是 M. avium subsp. 的第一份报告。在爬行动物中发生人型。抗微生物药物耐药性、MIC、IS901 分枝杆菌被定义为需氧、无运动、不产生孢子、耐酸酒精、棒状放线菌，它们属于分枝杆菌属，分枝杆菌科中的单一属（Goodfellow 和 Wayne 1982； Stackebrandt 等人，1997 年）。在过去几年中，该属内的物种数量迅速变化，目前约为 175 个（LPSN 2016）。大多数这些物种是腐生植物（Garrity 等人，2004 年）。非结核分枝杆菌 (NTM)，也称为环境分枝杆菌，是从水、土壤、灰尘和植物中分离出来的。它们分为两组：快速生长的分枝杆菌 (RGM)，其中在 7 天内出现可见菌落，以及需要更长孵育时间的缓慢生长的分枝杆菌 (SGM) (Tortoli 2009)。生长速度会影响抗生素敏感性以及受影响生物的临床症状和病理学（Tortoli 2003；CLSI 2011）。NTM 的特征之一是高水平的天然耐药性以及在次优药物暴露和选择期间获得的诱导性和突变性耐药性（van Ingen 等人，2012 年）。关于爬行动物，在各种各样的爬行动物中描述了大量自发性分枝杆菌感染病例，包括蜥蜴、蛇、鳄鱼和海龟（Soldati 等人，2004 年；Slany 等人，2010 年）。传播途径尚不完全清楚，但普遍认为皮肤损伤或食入是最有可能的感染方式。受影响的动物通常会在许多器官和皮下组织中观察到灰白色结节形式的肉芽肿病变。与哺乳动物结节不同，在爬行动物中没有观察到钙化（Soldati 等，2004）。由于无法人工繁殖，许多爬行动物宠物物种是从野外猎杀的，通常是进口的。由于这些事实，此类宠物更有可能携带外来病原体（Ebani 等人，2005 年）。关于人类，已经描述了分枝杆菌感染从爬行动物宠物传染给它们的主人的案例。尽管人们认为免疫功能低下的患者接受这类 ACTA VET 的风险最高。布尔诺 2017, 86: 101–107; https://doi.org/10.2754/avb201786010101 通讯地址：Irena Reil 克罗地亚兽医学院 Savska cesta 143, 10 000 Zagreb,克罗地亚电话？+3851/612-3635 电子邮件：reil@veinst.hr http://actavet.vfu.cz/ 感染，健康人群中也有病例（Hassl 等人，2007 年；Buricha 等人，2014 年）。本研究的目的是强调 NTM 物种在各种爬行动物宠物物种病理学中的重要性，以及它们对人类感染传播的流行病学意义，特别是在分离株的高水平抗微生物药物耐药性方面。材料和方法我们使用 2003 年至 2015 年期间常规检查的实验室样本进行了一项回顾性研究。该研究包括 16 只动物（6 只活体动物和 10 具尸体）：9 条蛇、6 条蜥蜴和 1 条龟（表 1） . 对于活体动物，粪便样品从笼子中随机收集到无菌管中，每只动物单独饲养。其中，5 只动物临床健康，1 只动物（病例编号 11）有位于后腿和后腿上方的皮肤病变，呈灰色色素沉着变化，形状不规则且略微隆起（图 VIII，图 1） . 特定皮肤病变的基本细菌学和真菌学检查给出了阴性结果。既没有进行组织病理学检查，也没有进行皮肤分枝杆菌测试。对于尸体，交付的器官均具有肉芽肿性炎症形式的可见病理变化。据我们所知，这些动物没有接受任何抗生素治疗。本研究中包括的动物（圈养出生或从野外进口）的来源未知。细菌检查根据 Kent 和 Kubica (1985) 描述的方案对动物组织和器官的样本进行匀浆、浓缩和去污。将材料接种在标准营养培养基上：Löwenstein-Jensen 斜面与丙酮酸、Löwenstein-Jensen 斜面与甘油和 Stonebrink 斜面，然后在 37°C 下孵育。使用 0.9% 十六烷基氯化吡啶鎓 (HPC)（Sigma-Aldrich，美国）在室温下对每个粪便样品进行净化一小时（Whittington 2010）。对于每个样本，如前所述，将 200 μl 均质悬浮液接种在标准营养培养基上。每周两次检查培养基的生长情况，持续八周。所有生长的菌落都进行了 Ziehl-Neelsen (ZN) 染色，以确认它们包含酸性细菌；将阳性菌落传代培养并通过分子方法鉴定。脱氧核糖核酸 (DNA) 分离 DNA 的分离是通过在 100 μl 蒸馏水（AccuGENE®，Lonza，Belgium）中分离含有 1 到 3 个 CFU 的完整培养物的环，然后在 95 °C 下振荡孵育 20 分钟来进行的350 rpm（Thermomixer Comfort，Eppendorf），然后以 14 000 g 离心一分钟（SL8，Thermo Scientific，Germany）。冷却至室温后，将上清液用作聚合酶链反应 (PCR) 作为 DNA 模板。培养的分枝杆菌的分子鉴定为了将菌落鉴定为分枝杆菌属的成员，使用含有编码所有分枝杆菌共有的65kDa抗原的基因的DNA序列的扩增。引物TB1（5'GAG-ATCGAG-CTG-GAG-GAT-CC-3'）和TB2（5'AGC-TGC-AGC-CCA-AAG-GTG-TT-3'）用于放大产物大小383 个碱基对（Hance 等，1989）。为了进一步鉴定，分离的分枝杆菌用 Geno Type® Mycobacterium CM（Hain Lifescience，Germany）进行了测试，商业 DNA 条带分析用于在物种水平上检测和鉴定分枝杆菌。分离株确认为M。使用引物 P1 FR300 (5'CAG-CCA-GCC-GAATGT-CAT-CC-3') 和 P2 FR300 (5'CAA-CTC- GCG-ACA-CGT-TCA-CC-3')。扩增产物大小取决于插入序列 IS901 的存在与否，因此对于 M. avium subsp. hominissuis Flanking Region 的扩增产物提供 300 个碱基对（未掺入 IS901），对于 M. avium subsp。avium 1700 碱基对（Kunze 等人，1992 年）。药物敏感性测试所选分离株的药物敏感性测试是通过微量稀释技术使用 VersaTREK 试剂盒（TREK 诊断系统，克利夫兰，俄亥俄州，美国）商业微孔板进行的，分为 RGM 和 SGM。细菌悬浮液的制备过程及其在微孔板上的应用是根据制造商的说明进行的。RGM 的孵育在 30 °C 下持续 3 天（如果生长不良，最多 2 天），SGM 在 35 °C 下孵育 7 天（如果生长不良，最多 14 天）。根据临床和实验室标准协会 (CLSI 2011) 和欧洲抗微生物药敏试验委员会 (EUCAST 2006) 对结果（敏感、中度敏感和耐药）进行解释。结果表示为最低抑菌浓度 (MIC) – 抗菌素 102 的最低浓度根据临床和实验室标准协会 (CLSI 2011) 和欧洲抗微生物药敏试验委员会 (EUCAST 2006) 对结果（敏感、中度敏感和耐药）进行解释。结果表示为最低抑菌浓度 (MIC) – 抗菌素 102 的最低浓度根据临床和实验室标准协会 (CLSI 2011) 和欧洲抗微生物药敏试验委员会 (EUCAST 2006) 对结果（敏感、中度敏感和耐药）进行解释。结果表示为最低抑菌浓度 (MIC) – 抗菌素 102 的最低浓度

"点击查看英文标题和摘要"