1、前言
规范屏障环境中实验动物安乐死操作，保障动物福利，制定本操作规程。
2、适用范围
适用于屏障设施内所有实验人员。
3、主体内容
实验动物安乐死应考虑动物伦理福利，实验人员的安全，实验动物组织采样需求等。实验中无论采取何种安乐死方法需要香港中文大学（深圳）IACUC委员会批准，如有变更及时向委员会提出申请。安乐死方法的选择本着尽量降低动物的恐惧，焦虑及疼痛的原则，禁止采用违背动物伦理福利的安乐死方法。
3.1 小鼠安乐死操作规程
3.1.1 CO2过量吸入安乐死
小鼠放在IVC笼盒中，动物密度不宜过大。放入动物前，不可先灌注CO2到安乐死箱内；放入动物后扣好笼盖，在放置水瓶的入口处接入CO2气管，打开气瓶阀门，以每分钟替换安乐死箱容积的10%~30%的速度灌注 CO2于箱内，让CO2充满笼盒。待小鼠晕倒失去运动能力后，可加大气体流量，最大流量不能超过0.5KPa，确定小鼠不动、不呼吸、瞳孔放大后关闭CO2后再观察两分钟确定小鼠死亡。小鼠安乐死后，关闭气阀，取出尸体存放于指定冰柜。低于14日龄的小鼠不宜单独使用CO2过量吸入法进行安乐死，需配合断颈处死。
3.1.2 颈椎脱臼安乐死
为降低小鼠的应激以及痛苦，实验人员需经过培训且考核通过后，方可选择此方法进行安乐死。操作时，将老鼠放在铁丝网上，实验人员一只手用力拉住小鼠尾部，另一只手的拇指和食指迅速用力按压小鼠头部；也可以使用镊子按住小鼠的颈部，手用力拉，使之颈椎脱臼，精髓与脑髓断离。此方法可使小鼠快速死亡，失去意识。
3.1.3 断颈法安乐死
适用于14日龄以下的小鼠，操作时使用锋利的剪刀将头部和颈椎分离。
3.2 大鼠安乐死操作规程
3.2.1 CO2过量吸入安乐死：
大鼠放在IVC笼盒中，动物密度不宜过大。放入动物前，不可先灌注CO2到安乐死箱内；放入动物后扣好笼盖，在放置水瓶的入口处接入CO2气管，打开气瓶阀门，以每分钟替换安乐死箱容积的10%~30%的速度灌注 CO2于箱内，让CO2充满笼盒。待大鼠晕倒失去运动能力后，可加大气体流量，最大流量不能超过0.5Kpa，确定小鼠不动、不呼吸、瞳孔放大后关闭CO2后再观察两分钟确定动物死亡。大鼠安乐死后，检查大鼠呼吸是否停止，按压脚趾有无疼痛反应，确认无误后，关闭气阀，将尸体存放于指定冰柜。大鼠CO2过量吸入致死时间长于小鼠。低于14日龄的大鼠不宜单独使用CO2过量吸入法进行安乐死，需配合断颈。
3.2.2 颈椎脱臼安乐死：
为降低大鼠的应激以及痛苦，实验人员需经过培训且考核通过后，方可选择此方法进行安乐死。操作方法同小鼠。
3.2.3 麻醉后颈椎脱臼安乐死:
在吸入麻醉或者注射麻醉后颈椎脱臼。此方法多用于麻醉后取材，取材结束后颈椎脱臼。
3.3 动物死亡确认
安乐死结束后，应确认动物的死亡，包括疼痛反应消失，用手或者镊子按压脚趾无反应；观察心跳呼吸停止，尤其是两周龄以下的幼鼠。CO2安乐死时由于缺氧耐受，可能会出现呼吸暂时停止，但动物仍没有死亡的情况，所以此类动物要配合颈椎脱臼法进行安乐死
3.4 动物尸体处理
动物实施安乐死后，用专用的袋子将尸体包装封存，然后放在实验动物中心指定的冰柜中，集中冷冻存放。不得随意存，随意丢弃，同时在登记表上做好记录。
