首页 > 分享 > 用于增强陪伴动物抗病毒免疫力的含抗氧化剂的食品组合物的制作方法

用于增强陪伴动物抗病毒免疫力的含抗氧化剂的食品组合物的制作方法

萌宠菠菠乐园
2025-02-08 12:55

专利名称：用于增强陪伴动物抗病毒免疫力的含抗氧化剂的食品组合物的制作方法
技术领域：
本发明包括增强陪伴动物抵抗和/或克服病毒感染的能力的组合物。本发明的组合物包括一定量的能有效增强陪伴动物的抗病毒免疫力的硫辛酸。
背景技术：
陪伴动物(如狗和猫)似乎遭遇到老龄化的问题。某些这样的问题已显示在常用的格言中。其中之一为“你不能教一只老狗新的戏法”。该格言源于观察，即随着狗的变老，其智能似乎降低，体能亦然。与思维、学习和记忆相关的心理活动似乎减弱(Cummings， B. J.，Head, Ε.，Rueh 1, W.，Mil gram, N. W. & Cotman，C. W. (1996)作为老化和痴呆的动物模型的犬禾斗动物(The canine as an animal model of aging and dementia). Neurobiology of Aging 17:259-268)。另外，在老龄化动物中可显示与智能变化相关的行为变化。很多原因都归因于能力的减少。这些能力的损失通常在老龄化的犬科动物和猫科动物中观察到。七岁或更老的狗和七岁或更老的猫科动物被认为是老龄的，它们可能经历这种问题。在成年陪伴宠物的食谱中存在显著水平的至少一种抗氧化剂或者喂给宠物不在其食谱中的显著水平的至少一种抗氧化剂，可抑制老龄陪伴宠物智能开始退化和/或更进一步维持成年陪伴宠物的智能进入老龄。
发明概述依据本发明，提供一种陪伴宠物的食物，其能满足成年宠物的普通营养需要，并且其还包含足量的抗氧化剂或其混合物，以抑制所述陪伴宠物在其老年时的智能衰退的发生。另一实施方案包括一种抑制老龄化陪伴宠物智能衰退的方法，其包括在所述宠物成年时喂给其足量水平的抗氧化剂或其混合物，以实现这种抑制。另一实施方案包括一种陪伴成年宠物的食物，其能满足成年陪伴宠物的普通营养需要，并且其还包含足以抑制所述宠物在其老年时智能衰退的量的抗氧化剂，所述抗氧化剂选自维生素E、维生素C、α-硫辛酸、L-肉碱及其任何的混合物。本发明的另一实施方案包括增加老龄化陪伴宠物的智能的方法，其包括在该宠物成年时喂给其足以增加智能的量的抗氧化剂或其混合物。另一实施方案包括增加成年陪伴宠物的智能的方法，其包括喂给宠物足以增加所述宠物智能的量的抗氧化剂或其混合物。另一实施方案包括宠物食品组合物，其包含有效增加陪伴动物的抗病毒活性的量的一或多种抗氧化剂，如硫辛酸。
发明详述一般描述本发明包括宠物食品组合物，其包含有效增加陪伴动物的抗病毒活性的量的硫辛酸。在某些实施方案中，增加陪伴动物的抗病毒活性的硫辛酸的有效量为至少约25ppm。在某些实施方案中，有效量为至少约50ppm。在某些实施方案中，有效量为至少约lOOppm。在某些实施方案中，有效量为约IOOppm-约600ppm。在某些实施方案中，有效量为约IOOppm-约200ppm。在某些实施方案中，所述陪伴动物为狗。在某些实施方案中，所述陪伴动物为猫。在某些实施方案中，所述有效量有效增强陪伴动物先天的抗病毒活性。在某些实施方案中，给予含硫辛酸的宠物食品组合物至少15日。在某些实施方案中，给予含硫辛酸的宠物食品组合物至少30日。在某些实施方案中，给予含硫辛酸的宠物食品组合物至少45日。在某些实施方案中，每日给予所述含硫辛酸的宠物食品组合物。喂养成年陪伴宠物(如犬科动物或猫科动物)的食物是喂给该年龄动物喂食的标准正常食物。下表为年龄1-6岁犬科动物的标准食谱。
组分指标蛋白质(干物质的％)23脂肪(干物质的％)15磷(干物质的％)0. 6钠(干物质的％)0. 3向陪伴成年宠物的食物中加入显著量的抗氧化剂或其混合物可在老龄宠物中带来行为指示性变化(demonstrative changes)出现的延迟，特别是智能的衰退，如尤其通过解决问题的能力所示的那样。向陪伴成年宠物的食物中加入一或多种抗氧化剂也可造成陪伴动物抗病毒活性的增加。术语“成年”一般是意指至少1-6岁的犬科动物和至少1-6岁的猫科动物。老龄的狗或猫是7岁或7岁以上。对犬科动物和猫科动物智能的损失已观察了多年。在很多方面都可表现为这种智能的损失。例如，对于犬科动物，其可表现为定向障碍、弄脏房屋、睡眠-清醒模式的改变、与人或其它宠物相互交流降低或改变，以及学习和集中注意力的能力丧失。这些情况也可在猫科动物中显现。在人中表现的阿尔茨海默尔病在犬科动物和猫科动物中并未发现。对于智能的这种损失，许多理论已获得进展。迄今为止，发明人未注意到任何饮食作用的疗程，其抑制智能的这种损失，或者如通过在狗和猫中的目标参数所测定的，其在事实上可引起智能的正面变化。发明人成功地实现延迟这种衰退的开始。通过在成年陪伴宠物中使用他们发明的食物，可显示能将老龄宠物智能保持更长的时间段。基本上能停止或延迟智能的衰退。可改善记忆和学习能力。可增强整体的精神警觉度。可减慢与老龄化有关的认知衰退。对于认知功能障碍综合征，可减慢其在老龄狗中的发展，并控制与这种综合征相关的临床征象。适当的预防和需要这些成分的宠物是所述目标群。本发明人还惊奇地发现，加入一或多种抗氧化剂(如硫辛酸)可用于增强陪伴动物(如狗和猫)的先天的抗病毒免疫功能。当指抗病毒免疫功能时，本文所用的术语“增强”或“增加”指陪伴动物对抗原具有增强的免疫响应的能力，由此对陪伴动物系统感染有更强的抵抗力或可更快地从陪伴动物系统清除病毒感染。因此，吃了含抗氧化剂(如硫辛酸)的宠物食品的陪伴动物(如狗)比未食用抗氧化剂的动物具有更强的抵抗力或将更快地清除病毒感染。实现此目的的食物中的成分为抗氧化剂或其混合物。抗氧化剂是一种消除游离基的物质。这类物质的实例包括食物，如银杏、柑桔果肉(citrus pulp)、葡萄皮渣、番茄渣、胡萝卜和菠菜，所有都优选为干燥的，以及各种其它物质，如胡萝卜素、硒、辅酶QlO(泛醌)、叶黄素、生育三烯酚、大豆异黄酮、S-腺苷甲硫氨酸、谷胱甘肽、牛磺酸、N-乙酰半胱氨酸、维生素Ε、维生素C、α -硫辛酸、L-肉碱等。可将维生素E作为生育酚或生育酚混合物及其各种衍生物，例如酯如维生素E的乙酸酯、琥珀酸酯、棕榈酸酯等给予。优选α型，但可包括β、γ和δ型。优选D型，但外消旋混合物也可接受。所述各型和衍生物被宠物摄取后将在维生素E类活性中起作用。可将维生素C在这种食物中作为抗坏血酸及其各种衍生物，如磷酸钙盐、胆固醇盐、2-单磷酸盐等给予，其被宠物摄取后将在维生素C类活性中起作用。它们可以是诸如液体、半固体、固体和热稳定形式的任何形式。可将α-硫辛酸可作为α -硫辛酸或硫辛酸酯衍生物(如在美国专利5，621，117中所述)、其外消旋混合物、盐、酯或酰胺加入到食物中给予。可将L-肉碱在食物中给予，并可使用肉碱的各种衍生物，例如盐如盐酸盐、富马酸盐和琥珀酸盐，和乙酰化肉碱等。计算食物中所给予的活性物质本身的量，所有量均以食物的(基于干物质) 计，所述活性物质作为游离物质来测定。所使用的最大量不应产生毒性。可使用至少约IOOppm或至少约150ppm的维生素Ε。在某些实施方案中，可使用的范围为约500至约1，OOOppm0虽然不是必然的，但一般不超过约2，OOOppm或约1，500ppm 的最大值。对于维生素C，使用至少约50ppm，理想是至少约75ppm，且更理想是至少约 lOOppm。可使用非毒性的最大量。硫辛酸的量可从至少约25ppm变化，理想是至少约50ppm，更理想是至少约 lOOppm。在不同的实施方案中，可给予狗的硫辛酸的范围为约150ppm至约4500ppm。在不同的实施方案中，可给予狗的硫辛酸的范围为约65ppm至约^OOppm.。最大量可从约IOOppm 至600ppm或至保持对宠物无毒性的量之间变化。在某些实施方案中，范围为从约IOOppm 至约 200ppm。对于犬科动物，约50ppm，理想是约200ppm，更理想是约300ppm的L-肉碱是有用的最小量。对于猫科动物来讲，可使用稍高的最小量的L-肉碱，如约100ppm、200ppm和 500ppm。可使用非毒性最大量，例如小于约5，000ppm。对于犬科动物，可使用较低的量，例如小于约5，OOOppm0对于犬科动物，优选的范围是约200ppm至约400ppm。对于猫科动物，优选的范围是约400ppm至约600ppm。可使用约l_15ppm的β -胡萝卜素。可使用约0. 1至最多约5ppm的硒。可使用至少约5pm的叶黄素。可使用至少约25ppm生育三烯酚。可使用至少约25ppm辅酶QlO。可使用至少约50ppm的S-腺苷蛋氨酸。可使用至少约IOOOppm的牛磺酸。可使用至少约25ppm的大豆异黄酮。可使用至少约50ppm N-乙酰半胱氨酸。可使用至少约50ppm的谷胱甘肽。可使用至少约50ppm的银杏提取物。以下是具有高ORAC(氧自由基吸收能力)含量的原材料当以包含物(以总量5%替代低ORAC成分，如玉米)加入到食物中时，它们增加了全部食物(overall diet) 的ORAC含量，并且增加了食用含有这些成分的食物的动物血浆ORAC含量。如果向食物中加入包含物和四种其它成分(共计5%)的组合，优选可使用每克干物质含ORAC含量> 25 μ mol的iTrolox equivalents (抗氧化当量)的任何成分。菠菜渣、番茄渣、柑桔果肉、葡萄皮渣、胡萝卜粒、茎椰菜(Broccoli)、绿茶、银杏和玉米面筋粉。
实施例1将17只2-4岁成年比格尔犬(beagle dogs)随机分成对照组和强化食物组 (enriched diet group)(对照组η = 8，富含抗氧化剂组η = 9)。对照食物中包含59ppm 维生素E和< 32ppm维生素C。试验食物含有900ppm维生素E和121ppm维生素C、260ppm L-肉碱和135ppm α -硫辛酸。开始食用所述食物后约1个月，给狗第一个解决问题的任务是地标辨别学习任务，这是一个空间注意力的测试(Milgram，N. W.，Adams, B.，Callahan, H.， Head, Ε.，Mackey, B.，Thirlwell, C. & Cotman, C. W. (1999)狗的地标辨别学习(Landmark discrimination learning in the dog). Learning & Memory,6 :54-61)。地标辨别学习要求受试者在一目标附近选择一个特定的物体。但是，最初的学习以狗的学习目标识别任务的能力为基础。我们以前已发现老化对识别学习的影响取决于任务的难度。当学习地标0测试时，食用强化食物的成年狗比食用对照食物的成年狗犯较少的错误(对照组平均值=31. 1，强化组平均值=15. 1)。使成年狗继续进行地标1和2测试，其中将地标从确定位置(positive well)向远处移动。强化食物组的成年狗比对照食物组的成年狗在学习地标0-2时犯较少的错误(地标平均错误数0+1+2 (对照组)=132. 9 ；地标平均错误数0+1+2 (强化食物组的狗)=87. 1)。
实施例2
本研究使用30只随机来源的成年狗进行。狗在试验开始前至少为10月龄、未怀孕、未泌乳并有适当的体重。将动物随机分为5个食疗组，每组3只雄性和3只雌性。在2周的摄食前期(表1)，给所有的狗喂食满足或超过美国官方饲料管制协会 (American Association of Feed Control Officials) (AAFC0 2000)建议的所有营养推荐量的对照食物(加入Oppm DL- α -硫辛酸)。经过该摄食前期后，将狗随机分为5个治疗组，其分别包含下列之一的DL- α -硫辛酸指标(基于干物质计):0ppm、150ppm、1，500ppm、 3，000ppm、4，500ppm。在所有的食物中，对照组和α -硫辛酸组，都加入维生素E，其存在的量为600-1000国际单位水平，并加入水平为100-200ppm的维生素C。除水外，试验食物是唯一的营养来源。淡水无限制供给。选择狗并称取最初的体重后，根据预期的食物ME，计算各狗的食量。初始食量的计算以狗的维持能量需求(MER)为基础，MER通过维持正常活动的因子校正(modified by a factor to account for normal activity)，按下式计算
MER(千卡/日)=1. 6乘RER(静态能量需求) 其中:RER(千卡/日)=70乘体重(kg). sup. 0. 75.每周给狗称重，并按需要调整食量，以便喂给足量食物以保持它们的最适体重。测量的最适体重为5分等级制的3分。如果调整食量后，狗的体重未维持在初始体重的-10% 之内，则将狗从研究中排除。记录所有体重和食物摄取量的测定值。将样品研磨，将0. 100. +-. 0. OOlg样品提取2次至5. Oml磷酸盐缓冲液(IOmM Na2HPO4,2mM 乙二胺四乙酸(EDTA)、0. 9% NaCl, pH 7. 4)中。将 250 μ L 提取物置于 5ml 带有特氟龙线性管帽的玻璃离心管中。加入15yL EDTA溶液(IOOmM EDTA，用约IM NaOH调节至pH 7. 8)和50 μ L新鲜制备的5mM 二硫赤藓糖醇(dithioerythritol) (DTE)。将该溶液涡旋并在室温下孵育5分钟。然后加入10 μ L IM H3PO4和2. Oml乙醚。将各管盖帽、涡旋并在室温下以1500x g离心3分钟。将乙醚层转移至一单独的5ml玻璃离心管中，同时将水层用1.5ml乙醚提取2次。合并同一样本的所有提取液。然后在室温下，在水浴中，在氮气蒸发器内干燥提取物。此时将样本封盖并冷冻过夜。然后将干燥的提取物解冻，用70yL SDS/EDTA溶液(0. 11%十二烷基硫酸钠 (SDS)、15mM EDTA、0. 9% NaCl)和5 μ L新鲜制备的ImM DTE重新制成溶液。随后将50 μ L 新鲜制备的NaBH4W入到各管中。将各管涡旋并在室温下孵育10分钟。10分钟后，将样本在-70°C下冷冻。加入20 μ L 2Μ HC1，然后将溶液解冻。溶液解冻后，加入800 μ L IOOmM NH4HCO3。将溶液涡旋，并加入5 μ L IOOmM单溴二胺(monobromobimane)的乙腈溶液(mBBr)。然后在室温下，将该溶液在暗处孵育90分钟。通过用1. 5ml 二氯甲烷提取，从孵育后的样本中除去过量的mBBr和DTE衍生物。将水层进行HPLC。使用流动相分离硫辛酸，所述流动相由30%乙腈、乙酸组成，用约2M NH4OH调节至pH3. 95，以1. OmL/min的流速泵送，每次进样等度洗脱15分钟。该制备推定所述挤压食物的密度等于lg/ml。在开始进行研究前2周以及还在研究的第0、观、56、84、112、140和168日，无菌收集全血用于全血细胞计数和血液生化分析。另外，在进行食物干预的第0、观和84日，收集 15ml全血用于淋巴细胞的分离。将肝素化全血分层置于50ml Accuspin尖底离心管(Sigma Chemical)内，然后加入等体积的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在不振摇下，将样本以700x g离心30分钟。收集单核细胞，转移至15ml尖底离心管内，再悬浮于l_3ml的PBS中，如以前一样离心(首次清洗)。如同首次清洗进行第二次清洗。最后，收集细胞并悬浮于高氯酸(10%W/V)中，在-70°C下冷冻待分析用。将样本从-70°C冰箱中转移至里面带有干冰的冷却器内。在冷冻离心机内，将各管以12，OOOrpm速度离心5分钟。将一等份用于谷胱甘肽(GSH)分析的样本的上清液转移至圆锥形试管中。根据Jones (Jones等)改良的Reed和其同事(Fariss等)的方法，进行所述酸可溶解的提取物的衍生化。简略地讲，将150 μ L外标提取物加入到1. 5ml微量离心管(印pendorf tube)中，接着加入20 μ L y -glu-glu内标物和50 μ L IAA,然后混合。用KOH-KHCO3工作液，将该溶液调节至PH约为10(紫色)。在室温下，将溶液于暗处孵育1小时。加入与总体积相同体积的桑格氏试剂(Sanger’ s reagent)，然后在室温下，将该溶液于暗处孵育过夜(20小时)。孵育后，将溶液以12，OOOrpm速度离心5分钟，将上清液转移至另一个1. 5ml微量离心管中。将200 μ L上清液加入到一个具有300 μ L入口的琥珀色非针头式过滤器 (autovial)内，用折波钳(crimper)固定顶端以进行HPLC分析。采用(Fariss，Jones)所述的溶剂和分离条件。定量确定相对于可靠标准品 (authentic standards)的GSH和GSSG的水平。使用Y -谷氨酰基(glutamyl)-谷氨酸盐作为内标物评估衍生化效率。临床化学、血液学和体重相对于基线值的比较通过基于SAS (针对具有设定为P < 0. 05的显著性意义的窗)的配对t检验进行分析。通过单向方差分析(ANOVA)分离各测定时间点的平均值，显著性意义设定为P < 0. 05。各组之间84日和基线之间的GSH:GSSG 的差异性通过单向方差分析(ANOVA)进行窗的SAS分析，显著性意义设定为P < 0. 05。
结果连续7个测定(0，28，56，84，112，140，168日)测得的食物中硫辛酸的浓度(ppm) 处于所期望的测定敏感度和一般在我们设备中遇到的生产参数的范围内(表2)。食物摄入数据不显著。所有组别中的大多数动物6个月摄取的食物平均都比研究开始时更多。除在4，500ppm包含物组中最初出现一些体重减轻，但该变化经6个月时间呈现逆转之外，体重数据并不显著。身体条件的评分似乎并不受这种体重较少损失的影响。常规的身体检查并未暴露出任何与营养相关的异常情况或DL- α -硫辛酸毒性的证据。研究群体中的所有动物在整个研究期间都保持正常。在研究期间，观察到有几只动物出现偶尔的呕吐；但是，未观察到将导致人们得出呕吐可能是由于硫辛酸所引起的这个结论的趋势。最高包含物组中的一只动物在21日时因体重减轻和白细胞增多而从研究中去除。研究结束时该动物白细胞增多并未消除，因此推断归咎于某些其它的疾病过程。当将观、56、84、112、140和168日血清生化值与相同组别狗的最初值比较时，注意到几个统计学上的差异，但是，不认为这些具有生物学上的意义，因为这些值处于实验室参考值范围内或非常接近实验室参考值的范围，并注意到在数月内保持一致的趋势。各时间期限内对照组和其它治疗组之间的比较也显示出几种统计学上的差异，但是，不认为这些具有生物学上的意义，因为这些值处于临床实验室参考值范围内或非常接近临床实验室参考值的范围，并且未出现这样的趋势。当将第观、56、84、112、140和168日的血液学检测值与相同组别的狗的最初值比较时，注意到几个统计学上的差异性，但是，不认为这些具有生物学上的意义，因为这些值处于实验室参考值范围内或非常接近实验室参考值的范围，并且未出现这样的趋势。各时间期限内对照组和其它治疗组之间的比较显示出几种统计学上的差异性，但是，不认为这些具有生物学上的意义，因为这些值处于临床实验室参考值范围内或非常接近临床实验室参考值的范围，并且未出现这样的趋势。
GSH: GSSG 比率经84日的喂养，GSH:GSSG比率的变化显示食物的显著的整体效果(P = 0. 024)，所有添加物组别的所述比率增加(表幻。方差分析(ANOVA)显示出最低和最高包含物食物与基础食物相比的显著性差异，但是，增加的最大值在最低包含物水平中。即最高和最低包含物的GSH:GSSG比率的变化显著不同于在基础食物中这种相同时间期限观察到的变化。第84日未能检测到4个点的比率，因为在任何这些样本(1个对照组，3个治疗组)中都未检测到GSSG。因此，如果该测试法灵敏度足以检测第84日低水平的GSSG，则可显示添加物组别的甚至更高的GSH:GSSG比率的值。
表权利要求
1.一种宠物食品组合物，其包含有效量的增强陪伴动物的抗病毒活性的硫辛酸，其中所述增强陪伴动物的抗病毒活性的硫辛酸的有效量为至少约25ppm。
2.权利要求1的组合物，其中所述有效量为至少约50ppm。
3.权利要求1的组合物，其中所述有效量为至少约lOOppm。
4.权利要求1的组合物，其中所述有效量为约IOOppm至约600ppm。
5.权利要求1的组合物，其中所述有效量为约IOOppm至约200ppm。
6.权利要求1的组合物，其中所述陪伴动物为狗。
7.权利要求1的组合物，其中所述陪伴动物为猫。
8.权利要求1的组合物，其中所述有效量有效增强陪伴动物先天的抗病毒活性。
全文摘要
本发明包括用于增强陪伴动物抵抗和/或克服病毒感染的能力的组合物。本发明组合物包括一定量的能有效增强陪伴动物的抗病毒免疫力的硫辛酸。
文档编号A61K31/385GK102245033SQ200980151643
公开日2011年11月16日申请日期2009年12月16日优先权日2008年12月16日
发明者J·A·布洛克曼, N·Z·弗兰茨, S·C·奇克申请人:希尔氏宠物营养品公司