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一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法

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2025-02-19 08:28

本发明涉及中药成分分析及质量检验，更具体地说，它涉及一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法。

背景技术：

1、胶类中药在我国有着悠久的历史，其中龟甲胶作为我国常见的滋补药之一，主要由乌龟的背甲或腹甲加工制成的固体胶。具有养阴潜阳，益肾强筋壮骨之功效，并兼有补血益气止血之功效。临床上常用于治疗遗精、神经衰弱、肺结核等疾病。

2、近年来由于市场的扩张导致胶类中药的稀缺，尤其是龟甲胶的质量参差不齐。部分生产企业为了获取高额利润，不惜用牛皮、猪皮或其他动物的皮经过多次加工制成伪品龟甲胶。这些伪劣龟甲胶不仅疗效甚微，增加使用者的经济负担，甚至对人民群众的健康产生危害。自《中华人民共和国药典》(2015年版)开始，就收载了利用胶类中药的特征多肽进行鉴别的方法，《中华人民共和国药典》(2020年版)仍沿用该法。此外，国家食品药品监督管理总局先后发布及批准胶类中药中加入猪皮源、牛皮源、驴皮源等杂皮源成分的检测方法。但是也存在许多不足之处：

3、在现有的技术中，均采用了常规的高效液相色谱－质谱法，仪器分析时间为40分钟，相对较长；

4、同时在现有技术中，胶类药材鉴别和非法成分添加检查均为独立方法；不能同时完成鉴别胶类中药的真伪和非法添加杂皮源成分的检查。每次实验只能完成单个胶类药材的鉴别或某一种成分的非法添加检测。

5、同时在现有技术中，序列分析级胰蛋白酶需新鲜配制使用，目前单价较高。按照现有标准实行的分开检测不仅耗时耗力，而且经济成本也更高。

6、因此，本发明旨在提供一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，以解决上述提到的相关问题。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，以解决上述提到的目前龟甲胶鉴别及掺伪检验方法繁琐且耗费较大的问题。

2、本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，包括采用超高效液相色谱－三重四极杆质谱联用仪进行龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测，具体包括以下步骤：

3、s1、设定质谱条件；

4、s2、设定色谱条件；

5、s3、溶液制备；

6、s4、测定，量取混合参比溶液、供试品溶液各5ul，按设定的质谱条件和设定的色谱条件测定，并记录色谱图；

7、s5、对测定结果进行判定。

8、本发明进一步设置为：所述质谱条件为：

9、离子源：电喷雾离子源(esi+)；

10、毛细管电压：2800v；

11、喷嘴电压：35v；

12、鞘气流：9l/min；

13、鞘气温度：400℃；

14、雾化气气流：5l/min；

15、雾化气温度：250℃；

16、扫描模式：多反应监测(mrm)。

17、本发明进一步设置为：所述色谱条件为：

18、色谱柱：acec18-pfp色谱柱(2.1mm×100mm,1.8μm)；

19、流动相：0.1％甲酸溶液(a)-乙腈(b)；

20、流速：0.3ml/min；

21、柱温：30℃；

22、进样器温度：4℃；

23、进样量：5μl。

24、本发明进一步设置为：所述溶液制备由制备稀释剂、制备胰蛋白酶溶液、制备阿胶对照药材溶液、制备黄明胶对照药材溶液、制备新阿胶对照药材溶液、制备龟甲胶对照药材溶液、制备混合参比溶液以及制备供试品溶液组成。

25、本发明进一步设置为：所述超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪采用agilent1290-6470a超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。

26、本发明进一步设置为：所述测定结果进行判定的原则为：

27、(1)龟甲胶鉴别

28、供试品以龟甲胶(m/z631.3(双电荷)→546.4和m/z631.3(双电荷)→921.4)离子对提取的供试品离子流色谱中，如呈现与混合参比溶液龟甲胶对照药材色谱保留时间一致的色谱峰，可鉴别供试品为龟甲胶；

29、(2)杂皮源成分检查

30、①供试品的阿胶(m/z539.8(双电荷)→612.4和m/z539.8(双电荷)→923.8)黄明胶(m/z641.3(双电荷)→726.2和m/z641.3(双电荷)→783.3)、新阿胶(m/z774.5(双电荷)→977.8和m/z774.5(双电荷)→1034.6)提取离子流色谱中，未同时检出与混合参比溶液色谱相应的色谱峰，视为未检出；

31、②供试品的阿胶、黄明胶、新阿胶三种提取离子流色谱中，任一检出与混合参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中阿胶m/z539.8(双电荷)→612.4、黄明胶m/z641.3(双电荷)→726.2、新阿胶m/z774.5(双电荷)→977.8的色谱峰面积值不大于混合参比溶液中相应的峰面积值者，视为未检出；

32、③供试品的阿胶、黄明胶、新阿胶三种提取离子流色谱中，任一检出与混合参比溶液色谱相应的色谱峰，且供试品色谱中阿胶m/z539.8(双电荷)→612.4、黄明胶m/z641.3(双电荷)→726.2、新阿胶m/z774.5(双电荷)→977.8的色谱峰面积值大于混合参比溶液中相应的峰面积值者，视为检出对应的杂皮源成分。

33、综上所述，本发明具有以下有益效果：

34、在本发明中，通过使用超高效液相色谱-三重四极杆质谱技术，发明了一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分同时检测的方法，并对该方法进行了验证和评价。数据证明本方法专属性、重复性、灵敏度和耐用性均较好，可用于龟甲胶中药质量的快速检验。

技术特征：

1.一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，其特征是：包括采用超高效液相色谱－三重四极杆质谱联用仪进行龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测，具体包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，其特征是：所述质谱条件为：

3.根据权利要求1所述的一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，其特征是：所述色谱条件为：

4.根据权利要求1所述的一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，其特征是：所述溶液制备包括：制备稀释剂、制备胰蛋白酶溶液、制备阿胶对照药材溶液、制备黄明胶对照药材溶液、制备新阿胶对照药材溶液、制备龟甲胶对照药材溶液、制备混合参比溶液以及制备供试品溶液。

5.根据权利要求1所述的一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，其特征是：所述超高效液相色谱－三重四极杆质谱联用仪采用agilent1290-6470a超高效液相色谱－三重四极杆质谱联用仪。

6.根据权利要求1所述的一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，其特征是：所述测定结果进行判定的原则为：

技术总结
本发明公开了一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测方法，涉及中药成分分析及质量检验技术领域，其技术方案要点是：包括采用超高效液相色谱－三重四极杆质谱联用仪进行龟甲胶鉴别和杂皮源成分的同时检测。本发明通过使用超高效液相色谱－三重四极杆质谱技术，发明了一种龟甲胶鉴别和杂皮源成分同时检测的方法，并对该方法进行了验证和评价。数据证明本方法专属性、重复性、灵敏度和稳定性均良好，可用于龟甲胶中药质量的快速检验。

技术研发人员：沈沅,余超群,毛迎松
受保护的技术使用者：重庆医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15