马齿苋对实验性肠炎大鼠的保护作用及其机制研究
马齿苋对实验性肠炎大鼠的保护作用及其机制研究
【摘要】： 马齿苋(Portulaca oleraceaaL.)是马齿苋科植物马齿苋的全草,是一种广泛分布的药食同源植物。其性寒味酸,具有清热燥湿、凉血解毒的作用,在中医临床中多用于治疗热毒血痢、痔疮便血,外用治疗各种疮疡肿毒。肠炎是畜牧业和宠物临床中常见的疾病,严重影响着经济效益和宠物及主人的生活质量。本研究在制造了两种大鼠肠炎模型的基础上,探究马齿苋水提液对肠炎的治疗效果,并以大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)和小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)为细胞模型,探究马齿苋及其主要成分槲皮素和山奈酚的抗炎作用及分子机制。动物试验试验方法:Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为五组,分别是对照组、造模组、高(10g/Kg)、中(7.5 g/Kg)、低(5 g/Kg)浓度药物组,药物组每日灌服相应剂量的马齿苋水提液。分别采用脂多糖(LPS)腹腔注射/硫酸葡聚糖(DSS)自山饮水的方法制造大鼠感染性/非感染性肠炎模型。通过观察大鼠整体状态、疾病活动指数、肠道微观状态评价马齿苋水提液的药效。通过生化试剂盒检测大鼠肠组织髓过氧化物酶(MPO)、ELISA方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性因子表达、Western blot和免疫组织化学检测组织中相关通路蛋白的表达初步探究马齿苋水提液的抗炎分子机理。试验结果及结论:马齿苋水提液对肠炎大鼠有良好的保护作用,可以显著改善大鼠整体状态,降低疾病活动指数,缓解肠绒毛损伤。马齿苋水提液降低肠组织MPO和炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的表达,并抑制了 TLR4和NF-κB通路蛋白的表达。说明马齿苋水提液对感染性和非感染性肠炎有一定的保护作用。细胞试验试验方法:原代培养的RIMVECs和细胞系IEC-6分为对照组、造模组、高中低浓度药物(马齿苋水提液100 μg/mL;10 μg/mL;1 μg/mL/槲皮素 80 μM;40 μM;20 μM/山奈酚 50 μM;25 lM;12.5 μM)组,药物组用含相应浓度药物的培养基预处理后,用LPS刺激。生化法检测高浓度LPS对各组细胞的细胞活件和乳酸脱氢酶(LDH)漏出影响,ELISA方法检测低浓度LPS对各组细胞的炎性介质(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、ICAM-I、VCAM-1)的表达,Western blot 方法检测炎症相关蛋白通路(TLR4、NF-κB、MAPK、STAT)表达来探究马齿苋水提液/槲皮素/山奈酚对大鼠肠炎相关细胞的抗炎作用及其分子机制。试验结果及结论:马齿苋水提液有效抑制高浓度LPS诱导的RIMVECs和IEC-6损伤,抑制低浓度LPS诱导的细胞表达TNF-αt、IL-1β、IL-6等炎性因子,并抑制TLR4/NF-KB通路的蛋白表达。槲皮素和山奈酚都有效抑制高浓度LPS对RIMVECs的损伤,并抑制低浓度LPS诱导的TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1、VCAM-1过量表达。另外,槲皮素和山奈酚抑制LPS诱导的RIMVECs中TLR4/NF-κB/MAPK/STAT通路蛋白的表达。结论:马齿苋水提液有效保护大鼠的感染性和非感染性肠炎。马齿苋的抗炎作用是通过调控TLR4/NF-κB/MAPK/STAT实现的。槲皮素和山奈酚是马齿苋的主要有效成分。
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
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研究组方向——动物生态与保护生物学院重点实验室
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