【IACUC】实验动物镇静、止痛、麻醉和安乐死指南
发布时间：2018-03-21 发布单位：
1目的：规范实验动物镇静剂、麻醉剂和止痛剂的使用。以及实验动物安乐死方法，确保人道的处理动物。
2范围：根据AAALAC要求，参考Laboratory Animal Anaesthesia 和AVMA Guidelines on Euthanasia推荐的动物安乐死方法制定本使用指南，为各院系PI撰写研究计划提供正确合理的镇静、麻醉和安乐死选择药物和方法。
对于给药方式说明：IP----腹腔注射 SC----皮下注射 IM----肌肉注射 IV----静脉注射 PO----口服
3设备与材料：CO2气瓶；配带盖和各种动物品种大小的麻醉诱导箱；麻醉机；注射剂或吸入剂；适当规格的注射器和针；个人防护装备至少包括防护服、手套、帽子和口罩等
4．步骤：
4.1 麻醉规程
麻醉时应认真检查所用的麻醉/止痛剂的有效使用日期，不可以使用过期的药物。
从开始麻醉到动物清醒必须对动物进行实时监护。麻醉的动物会反应迟钝、无方向感，所以麻醉时应将动物放置笼中或采取适当的措施防止动物造成损伤。动物完全麻醉（完全失去意识）方可开始手术。
麻醉期间应注意对动物采取适当的保温措施，如电热毯或红外线加热灯，防止动物体温降低。
4.2对麻醉程度的检测
如果动物有翻身反应或对疼痛和刺激发生反应，如表现蠕动、移动、收回肢体，则手术必须延迟进行。
深度疼痛测试，用手指挤压动物的后肢脚趾，如果动物有反应如缩回后肢，则动物意识未完全消失；如果动物对测试无反应，则为无意识或意识消失，麻醉达到手术要，可以开始手术。
外科手术开始时，动物应充分松弛、对疼痛刺激无反应、呼吸和心率正常。
4.3 设施
在动物房或手术室实施麻醉。但麻醉时应尽量不要在其它动物听到、看见和闻到的区域进行。
4.4局部麻醉
局麻是在小的非创伤性手术时，减轻动物痛苦而采取的措施。局麻的选择将取决于手术所需时间的长短、场所和动物品种。常用的局麻药有盐酸利多卡因和盐酸普鲁卡因。
4.5剂量计算
根据动物的体重，计算麻醉药合适的给药剂量。
例如，用氯胺酮+安定麻醉300g的大鼠
氯胺酮的剂量是75mg/kg，安定是5mg/kg
因此，0.300kg×75mg/kg=22.5mg氯胺酮
0.300kg×5mg/kg=1.5mg安定
4.6 根据动物品种选择麻醉药物、剂量和给药途径
吸入麻醉剂（如异丙烷）所有品种的动物均适用。钢瓶中压缩CO2气体与氧气（50:50）混合至100%的CO2可以用于啮齿类动物短期吸入麻醉剂。
4.7.1 CO2麻醉
CO2诱导短暂的失去意识并适用于某些实验过程，如眼眶后静脉丛采血和一些注射。每次只麻醉一只动物。
使用一个与氧气未混合的CO2相连的容器。打开气瓶的主要阀门，通过微调从而调整气体压力。把动物放进气体流动的容器并关上容器盖子。离开动物1-3/2分钟直到动物呼吸缓慢和无意识，从容器中取出动物开始实验。动物将维持20-30秒无意识状态。如果需要再麻醉20秒，追加一次麻醉剂量，不可以连续超过2次追加CO2麻醉。动物在容器中不可以放置超过5/2分钟。
动物将完全恢复，动物一恢复意识就放回原笼中。
在动物放进容器前，通过往眼里滴一滴盐酸丙对卡因更有宜于眼眶后静脉丛采血。局麻可以使动物减少对操作的敏感性并延长动物失去意识的时间，动物大约10秒钟就失去意识。先于采血前眼睛用薄纸擦拭以除去残余的盐酸丙对卡因。
4.7.2 常用的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.1小鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.1.1 小鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物剂量给药方式效果阿托品0.04 mg/kgSC or IP抗胆碱能作用；减少唾液，呼吸道分泌物，阻止血管迷走神经反射安定5 mg/kgIP轻微镇静作用；不能止痛氟胺酮0.1-0.3 ml/kgIP轻度镇静，中度止痛；氯胺酮100-200 mg/kgIM深度镇静，轻微止痛；缺乏肌肉松弛作用4.7.2.1.2 小鼠麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度(轻度/外科麻醉)持续时间(min)恢复时间(min)氯胺酮﹠安定100mg/kg﹠5mg/kgIP保定/麻醉20-3060-120丙泊酚26mg/kgIV外科麻醉5-1010-15氟胺铜﹠安定0.4ml/kg&5mg/kgIP or IP外科麻醉20-40120-240丙泊酚26mg/kg(然后2-2.5mg/kg/min)IV外科麻醉1-12hours10-15异氟烷0.41ml/minat 4L/minFresh gas flow(使用浓度2%)吸入外科麻醉----三溴乙醇（阿弗丁)125-240 mg/kg(使用浓度0.25%)IP外科麻醉15-4560-120
注： 100%阿佛丁（三溴乙醇+叔戊醇=1:1配成）；使用时用生理盐水进行稀释使用。
异氟烷使用需要面罩。
4.7.2.1.3小鼠止痛药物的选择
止痛剂剂量给药方式效果效果持续时间阿司匹林120 mg/kgPO轻微止痛-丁丙诺啡0.05-0.1mg/kgSC中等止痛8-12 Hours卡洛芬5 mg/kgSC中等止痛24 Hours美洛昔康5 mg/kgSC中等止痛24 Hours4.7.2.1.4 小鼠安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注戊巴比妥钠100-200 mg/kg所有小鼠可接受方法CO2----成年小鼠可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间颈椎脱臼----所有小鼠条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的技术4.7.2.2大鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.2.1 大鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物剂量给药方式效果阿托品0.05 mg/kgSC or IP抗胆碱能作用；减少唾液，呼吸道分泌物，阻止血管迷走神经反射氟胺酮0.2-0.5 ml/kgIM轻度/中度镇静，中度止痛；安定2.5-5 mg/kgIP or IM轻微镇静作用；不能止痛氯胺酮50-100 mg/kgIP or IM深度镇静，轻微止痛；缺乏肌肉松弛作用4.7.2.2.2 大鼠麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度（轻度/外科麻醉）持续时间 min恢复时间min氯胺酮﹠安定75mg/kg﹠5mg/kgIP轻度麻醉20-30120丙泊酚10 mg/kgIV外科麻醉510氟胺铜﹠安定0.6ml/kg﹠2.5mg/kgIP or IP外科麻醉20-40120-240丙泊酚10-12mg/kg（然后0.5-1.0mg/kg/min）IV外科麻醉1-12 hours10-15异氟烷0.41ml/minat 4L/minFresh gas flow(使用浓度2%)吸入外科麻醉----三溴乙醇（阿弗丁）300 mg/kgIP外科麻醉10-2045-90注： 100%阿佛丁（三溴乙醇+叔戊醇=1:1配成）；使用时用生理盐水进行稀释使用。
异氟烷使用需要面罩。
4.7.2.2.3大鼠止痛药物的选择
止痛剂剂量给药方式效果效果持续时间阿司匹林100 mg/kgPO中等止痛-卡洛芬5 mg/kgSC中等止痛24 Hours美洛昔康5 mg/kgSC中等止痛24 Hours丁丙诺啡0.01-0.05mg/kgSC or IV中等止痛8-12 Hours丁丙诺啡0.1-0.25mg/kgPO中等止痛8-12 Hours4.7.2.2.4 大鼠安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注戊巴比妥钠100-200 mg/kg所有大鼠可接受方法CO2 ----成年大鼠可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间颈椎脱臼----体重＜200g条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的技术颈椎脱臼前需要进行麻醉处理4.7.2.3豚鼠的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.3.1 豚鼠镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物剂量给药方式效果阿托品0.05 mg/kgSC抗胆碱能作用；减少唾液，呼吸道分泌物，阻止血管迷走神经反射安定5 mg/kgIP or IM深度镇静作用氟胺酮1.0 ml/kgIP or IM中度镇静，中度止痛；氯胺酮100 mg/kgIM深度镇静，轻微止痛；缺乏肌肉松弛作用4.7.2.3.2 豚鼠麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度（轻度/外科麻醉）持续时间 min恢复时间min氟胺铜﹠安定1.0ml/kg﹠2.5mg/kgIP or IM﹠IP外科麻醉45-60120-180氟胺铜﹠安定1.0ml/kg/h﹠2mg/kg（每4小时）IP ﹠IP外科麻醉1-12 hours120-180氯胺酮﹠安定100 mg/kg﹠5mg/kgIM保定/麻醉30-4590-120异氟烷0.41ml/minat 4L/minFresh gas flow(使用浓度2%)吸入外科麻醉----注： 异氟烷使用需要面罩。
4.7.2.3.3豚鼠止痛药物的选择
止痛剂剂量给药方式效果效果持续时间阿司匹林87 mg/kgPO轻微止痛-卡洛芬4 mg/kgSC中等止痛24 Hours丁丙诺啡0.01-0.05 mg/kgSC or IP中等止痛大约8-12 Hours4.7.2.3.4 豚鼠安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注戊巴比妥钠100-200 mg/kg所有豚鼠可接受方法CO2----成年豚鼠可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间4.7.2.4兔子的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.4.1 兔子镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物剂量给药方式效果阿托品0.05 mg/kgIM抗胆碱能作用；减少唾液，呼吸道分泌物，阻止血管迷走神经反射安定0.5-2 mg/kgIP or IM or IV由轻到重度镇静；不能止痛氟胺酮0.2-0.5 ml/kgIM轻到中度镇静，轻到深度止痛；氯胺酮25-50 mg/kgIM中度缓解镇静，中度止痛；缺乏肌肉松弛作用4.7.2.4.2 兔子麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度（轻度/外科麻醉）持续时间 min恢复时间min美索比妥10-15mg/kg（使用浓度1%）IV外科麻醉4-55-10丙泊酚10 mg/kgIV轻度麻醉5-1010-15氟胺铜﹠安定0.3ml/kg﹠1-2 mg/kgIM ﹠ IV外科麻醉20-4060-120氟胺铜﹠安定0.1-0.3ml/kg/h﹠1mg/kg（每4 小时）IV ﹠ IV外科麻醉1-12 hours60-120异氟烷0.41ml/minat 4L/minFresh gas flow(使用浓度2%)吸入外科麻醉----氯胺酮﹠安定25 mg/kg﹠5mg/kgIM ﹠IM外科麻醉20-3060-90注： 异氟烷使用需要“Bain's回路”或者“Ayre's三通管”。
4.7.2.4.3兔子止痛药物的选择
止痛剂剂量给药方式效果效果持续时间阿司匹林100 mg/kgPO轻微止痛不清晰卡洛芬4 mg/kgSC中等止痛24 Hours丁丙诺啡0.05-0.1mg/kgSC or IP中等止痛8-12 Hours4.7.2.4.4 兔子安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注戊巴比妥钠100-200 mg/kg所有兔子可接受方法CO2----成年兔子可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间颈椎脱臼----体重＜1 kg条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的技术(颈椎脱臼前需要进行麻醉处理)4.7.2.5犬的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.5.1 犬镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物剂量给药方式效果阿托品0.05 mg/kgSC or IM抗胆碱能作用；美托咪啶10-100ug/kgSC or IM or IV轻到深度镇静；轻到中度止痛乙酰丙嗪0.1-0.25 mg/kgIM轻到中度镇静作用氟胺酮0.1-0.2 ml/kgIM中度到深度镇静，中度止痛；4.7.2.5.2 犬麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度（轻度/外科麻醉）持续时间 min恢复时间min丙泊酚5-7.5 mg/kgIV外科麻醉5-1015-30丙泊酚5-7.5mg/kg（然后0.2-0.4mg/kg/min）IV外科麻醉20-3015-30丙泊酚5-7.5mg/kg（然后0.2-0.4mg/kg/min）IV外科麻醉1-12 hours10-15异氟烷0.41ml/minat 4L/minFresh gas flow(使用浓度2%)吸入外科麻醉----氯胺酮﹠美托咪啶2.5-7.5 mg/kg﹠40ug/kgIM or IM轻到中度麻醉30-4560-120注： 异氟烷使用需要“Bain's或者 MaGill回路”。
4.7.2.5.3犬止痛药物的选择
止痛剂剂量给药方式效果效果持续时间卡洛芬4 mg/kgSC中等止痛24 Hours美洛昔康0.2 mg/kgSC中等止痛24 Hours丁丙诺啡0.005-0.02 mg/kgSC or IP中等止痛8-12 Hours4.7.2.5.4 犬安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注戊巴比妥钠100-200 mg/kg所有犬可接受方法CO2----成年犬可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间氯化钾联合其他麻醉药----所有犬条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的技术（心内注射氯化钾前先进行麻醉处理）4.7.2.6小型猪的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.6.1 小型猪镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物剂量给药方式效果阿托品0.05 mg/kgSC or IM抗胆碱能作用；安定1-2 mg/kgIM轻到中度镇静作用；氯胺酮10-15 mg/kgIM镇静；保定4.7.2.6.2 小型猪麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度（轻度/外科麻醉）持续时间 min恢复时间min氯胺酮10-15 mg/kgIM镇静；保定20-3060-120丙泊酚2.5-3.5 mg/kgIV外科麻醉5-1015-30丙泊酚2.5-3.5mg/kg（然后0.1-0.2mg/kg/min）IV外科麻醉20-3015-30丙泊酚2.5-3.5mg/kg（然后0.1-0.2mg/kg/min）IV外科麻醉1-12 hours10-15异氟烷0.41ml/minat 4L/minFresh gas flow(使用浓度2%)吸入外科麻醉----氯胺酮﹠安定10-15 mg/kg﹠0.5-2mg/kgIM ﹠IM保定/轻度麻醉20-3060-90注： 异氟烷使用需要“Bain's或者 MaGill回路”或者“循环系统”。
4.7.2.6.3小型猪止痛药物的选择
止痛剂剂量给药方式效果效果持续时间卡洛芬2-4 mg/kgSC中等止痛24 Hours丁丙诺啡0.01-0.05mg/kgSC or IP中等止痛8-12 Hours4.7.2.6.4 小型猪安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注戊巴比妥钠100-200 mg/kg所有小型猪可接受方法CO2----成年小型猪可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间氯化钾联合其他麻醉药----所有小型猪条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的技术（心内注射氯化钾前先进行麻醉处理）打击头部----幼龄猪周龄条件可接受；要求技术，充分保定，和适当的力量4.7.2.7非人灵长类的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.7.1 非人灵长类镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物剂量给药方式效果阿托品0.05 mg/kgSC or IM抗胆碱能作用；减少唾液，呼吸道分泌物，阻止血管迷走神经反射安定1 mg/kgIM轻到中度镇静氯胺酮5-25 mg/kgIM中度镇静；保定；轻微止痛；4.7.2.7.2 非人灵长类麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度（轻度/外科麻醉）持续时间 min恢复时间min丙泊酚7-8 mg/kgIV外科麻醉5-1010-15氯胺酮﹠美托咪啶5 mg/kg﹠0.05mg/kgIM ﹠IM外科麻醉30-4060-120丙泊酚7-8 mg/kg（然后0.3-0.6mg/kg/min）IV外科麻醉1-12 hours10-15异氟烷0.41ml/minat 4L/minFresh gas flow(使用浓度2%)吸入外科麻醉----氯胺酮﹠安定15 mg/kg﹠1mg/kgIM ﹠IM外科麻醉30-4060-90注： 异氟烷使用需要“Bain's回路或者 Ayre's三通管（体重<10 kg）”
或者“MaGill回路（体重>10 kg）”。
4.7.2.7.3非人灵长类止痛药物的选择
止痛剂剂量给药方式效果效果持续时间氟胺铜0.3ml /kgIM良好止痛-卡洛芬3-4 mg/kgSC中等止痛24 Hours美洛昔康0.1-0.2 mg/kgSC中等止痛24 Hours丁丙诺啡0.005-0.01mg/kgIM or IV中等止痛8-12 Hours吗啡1-2 mg/kgSC or IM中等止痛4 Hours4.7.2.7.4 非人灵长类安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注戊巴比妥钠100-200 mg/kg所有非人灵长类可接受方法吸入麻醉CO2----成年非人灵长类可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间4.7.2.8鸟的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.8.1 鸟镇静剂和诱导麻醉药物的选择
术前诱导麻醉药物剂量给药方式效果氯胺酮（>1 kg）15-20 mg/kgIM轻微止痛；保定氯胺酮（<1 kg）30-40 mg/kgIM轻微止痛；保定4.7.2.8.2 鸟麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度（轻度/外科麻醉）持续时间 min恢复时间min氯胺酮﹠安定20-40 mg/kg﹠1-1.5mg/kgIM ﹠IM中等外科麻醉20-3030-904.7.2.8.3鸟止痛药物的选择
止痛剂剂量给药方式效果效果持续时间丁丙诺啡0.01-0.05mg/kgIM中等止痛8-12 Hours4.7.2.8.4 鸟安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注戊巴比妥钠100-200 mg/kg所有鸟可接受方法CO2 ----成年鸟可接受方法；幼龄动物和新生动物需要延长时间颈椎脱臼----所有鸟条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的技术（脱臼前进行麻醉处理）胸部压迫----小到中型鸟类条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的技术4.7.2.9鱼的镇静、麻醉、止痛和安乐死推荐药物和方法
4.7.2.9.1 鱼镇镇静、麻醉、止痛和诱导麻醉药物的选择
注射用麻醉剂剂量给药方式麻醉深度（轻度/外科麻醉）持续时间 min恢复时间minMS22225-300 mg/l沉浸外科麻醉盐酸苯佐卡因25-100 mg/l沉浸外科麻醉2 分钟诱导撤消后5分钟恢复注：1.苯佐卡因配置：首先200 mg苯佐卡因+5 ml 丙酮，进行溶解，再加入8 L 水配置成25ppm(25mg/l)的苯佐卡因。
2.小到中型鱼（金鱼和鲑鱼），MS222 浓度为100 mg/l。
4.7.2.9.2鱼安乐死的药物和方法选择
药物或方法剂量试用动物备注MS222≧300 mg/l所有鱼类可接受方法盐酸苯佐卡因≧100 mg/l成年鱼类可接受方法脑脊髓刺毁法----所有鱼类条件可接受；操作人员需要接受培训，并具备熟练的技术4.8 保存记录
需要所有麻醉程序的手写记录文件。记录应该包括但不仅局限于以下几点：
IACUC动物使用和管理方案编号
麻醉日期、时间和负责人签字
品系和个体或动物组别标记
使用的麻醉剂、止痛剂或镇静剂名称、剂量、给药途径和时间
如果需要在整个过程中监测生理参数（如心率、呼吸次数/节律、体温、粘膜色泽和足部的松弛度等）
4.9术后恢复
动物可与正处于恢复期的同一品系动物放在一个笼具中，也可单独放在一个饲养笼内，但不要与未麻醉的动物放在一起，防止恢复期动物受伤。动物恢复期必须保温。当动物恢复正常活动时，可以与其它动物放回同一笼或一个动物房间。随后几天必须定时对动物进行观察保证不出现并发症。
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