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低聚肽和VC复合固体饮料的抗氧化性研究

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2024-09-22 16:21

摘要：为评价低聚肽和VC复合固体饮料对乙醇诱导大鼠氧化损伤的保护作用，参照国食药监保化（2012）107号附件1“抗氧化功能评价方法”乙醇氧化损伤模型进行试验。将大鼠按体重随机分成空白对照组、模型对照组，受试样品低剂量组（0.42 g/kg）、中剂量组（0.83 g/kg）和高剂量组（2.50 g/kg），每天经口灌胃受试样品，灌胃容量为10 mL/kg·BW，空白对照组和模型对照组经口灌胃等体积的蒸馏水。30 d后，除了空白对照组，其他的各个试验组灌胃乙醇造成氧化损伤模型，检测血液中的丙二醛（MDA）、蛋白质羰基含量、超氧化物歧化酶（SOD）、还原性谷胱甘肽（GSH）的含量。研究结果表明：在试验期间大鼠的一切生理状态正常，低聚肽和VC复合固体饮料可以显著的降低大鼠血清内MDA的含量，极显著地降低蛋白质羰基的含量，极显著提高血清内SOD的活性以及GSH含量。因此在本试验条件下，低聚肽和VC复合固体饮料具有保护乙醇诱导大鼠氧化损伤的功能。

引起人类过早衰老的90%疾病的罪魁祸首是自由基，自由基在体内氧化加速人体的衰老，氧化损伤是一切损伤之母，减缓衰老的主要措施就是清除体内的自由基。研究表明人体具有清除多余自由基的能力，主要是人体内源性自由基清除系统起作用，例如体内的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶等都可以清除体内的一部分自由基，使体内的自由基保持平衡，要降低体内的自由基对人体的危害，除了依靠内源性自由基清除系统，还需要借助外源性自由基清除剂，利用这些物质与自由基先结合，降低自由基对人体的损害。常见的自由基清除剂有VC、VE、类胡萝卜素、多肽类等。

海洋鱼胶原低聚肽粉是一种新型无污染的深海鱼的皮和骨头精制而成，在食品、化妆品中作为原料或者添加剂使用，具有胶原含量高、易吸收、稳定性好，耐酸耐碱等特点[1]。海洋鱼胶原低聚肽粉作为一种优质的胶原蛋白，人体摄入后起到抗氧化的作用，同时改善疲劳感、烦躁和睡眠等[2-3]；能够补充所需的水分，解决皮肤和肌肉缺水的问题[4]；适时的补充了胶原肽，能使我们的皮肤保持年轻紧致；促进钙质与骨细胞的紧密结合，确保钙质不会流失和退化[5-7]；增加眼角膜的湿润度，保持眼睛透明度；使肌肉细胞之间连接紧密，使肌肉富有弹性和光泽；调节内分泌系统、保护及强化内脏功能；与免疫球蛋白结合，提高人体的免疫力。

VC作为一种常见的水溶性维生素，因其较强的生物活性而广泛应用于食品、药品和化妆品等行业，不仅具有较强的抗氧化活性[8-9]，研究表明维生素C能对人体全血红细胞起到抗氧化保护作用[10]、能够修复大鼠红细胞抗氧化能力[11]；还具有提高免疫功能[12]；帮助造血，促进伤口愈合，治疗坏血病[13]；预防和治疗感冒[14-15]；参与骨胶原蛋白的合成；促进钙的吸收，保护牙齿和骨骼；对侵入机体的有毒药物能与之结合并随尿液排出；降低胆固醇和毛细血管的脆性[16]；促进肝细胞的再生和肝糖原的合成；抗癌[17]等生物活性。

具有抗氧化活性的物质远远不止海洋鱼胶原低聚肽粉和VC，文献报道沙棘提取物能够提高老龄小鼠的抗氧化能力[18]；阿萨伊果的果实中含有花青素，具有极强的抗氧化活性[19]；石榴果中含有多酚类物质，具有清除体内自由基、延缓机体衰老等生物活性[20]。本产品低聚肽和VC复合固体饮料是由海洋鱼胶原低聚肽粉、VC、石榴果粉、沙棘提取物、阿萨伊果粉等较好的抗氧化物为原料按一定比例配伍制成的。通过建立乙醇氧化损伤模型，检测大鼠血清中的丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、蛋白质羰基含量、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、还原性谷胱甘肽（Reduced Glutathione，GSH）的含量来评价低聚肽和VC复合固体饮料的抗氧化功能，为低聚肽和VC复合固体饮料开发成为抗氧化的保健食品提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

VC：石药集团维生药业（石家庄）有限公司；海洋鱼低聚肽粉：武汉天天好生物制品有限公司；石榴果粉、沙棘提取物：湖南金农生物资源股份有限公司；异麦芽酮糖醇：嘉吉亚太食品系统（北京）有限公司；阿萨伊果粉：北京众康生物技术有限公司；柠檬酸：武汉市立品贸易有限责任公司；三氯蔗糖：翁源清怡食品科技有限公司；黄原胶：鄂尔多斯市中轩生化股份有限公司；麦芽糊精：山东西王糖业有限公司；蓝莓果粉：昆山拓丰食品有限公司。

JH5101 2026电子天平：上海精密仪器仪表有限公司；ACS-3A 90401571电子秤：上海台衡仪器仪表有限公司；UV-1700A11024504087紫外分光光度计：上海恒远生化试剂有限公司；BECKMAN AU680 2013072481自动生化仪：美国贝克曼库尔特有限公司。

丙二醛（MDA）测试盒：南京建成生物工程研究所，生产批号：20160521，有效期至：20170520；超氧化物歧化酶（SOD）测试盒：南京建成生物工程研究所，生产批号：20160518，有效期至：20161117；还原性谷胱甘肽（GSH）测试盒：南京建成生物工程研究所，生产批号：20160520，有效期至：20161119；蛋白质羰基含量测定测试盒：南京建成生物工程研究所，生产批号：20160525，有效期至：20161124；总蛋白试剂盒（双缩脲比色法）：上海执诚生物科技有限公司，生产批号：ZCJULO018，有效期至：20161215。

1.2 动物及环境

SPF级健康成年SD大鼠，雄性，体重180 g~220 g，50只，由上海杰思捷实验动物有限公司提供，生产许可证号：SCXK（沪）2013-0006。对购置的大鼠检疫4 d。期间每天检查大鼠1次，如有发现不健康的大鼠立即剔除，选用健康的大鼠进行实验。实验动物饲养室温度20℃~25℃，相对湿度40%~70%。实验动物使用许可证号：SCXK（沪）2013-0008。动物饲料由上海福贝宠物用品有限公司提供，登记证号：沪饲证（2014）04002。大鼠的饲养环境始终保持稳定，确保试验结果的可靠性。动物自由进食饮水。

1.3 大鼠的分组与处理

低聚肽和VC复合固体饮料的人体推荐量为5 g/60 kg·BW。设置低、中、高 3 剂量组，分别为 0.42、0.83、2.50 g/kg，分别相当于人体推荐量的5、10、30倍。取样品4.2、8.3、25.0 g分别加入蒸馏水至100 mL，充分混匀按此比例配置即成低、中、高3个剂量组的供试液。按照国食药监保化（2012）107号附件1“抗氧化功能评价方法”乙醇氧化损伤模型进行实验。检疫结束后，将实验大鼠按照体重随机分为1个模型对照组、1个空白对照组和3个受试样品剂量组，每组10只。3个剂量组给予相应剂量的受试样品灌胃，模型对照组和空白对照组给予相应溶剂蒸馏水灌胃。经口每日1次给予相应浓度的受试样品，大鼠的灌胃容量为10 mL/kg·BW。按照剂量设计连续喂养大鼠30 d。剂量分组如表1。

表1 剂量设计与分组情况
Table 1 Dose design and grouping

注：－表示无。

1.4 大鼠的处理与指标的测定

末次灌胃后，模型对照组和3个剂量组禁食16 h（过夜），然后一次性灌胃给予50%乙醇溶液12 mL/kg·BW，6 h后取血；空白对照组不作处理，不禁食取血。测血清MDA含量、蛋白质羰基含量、SOD活性和GSH含量。

1.5 数据分析

数据以均数±标准差（X±S）表示，用SPSS19.0版对数据进行Oneway－ANOVA分析。若数据呈非正态或方差不齐，进行适当的转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2 结果与分析

2.1 动物分组及体重变化

低聚肽和VC复合固体饮料对大鼠抗氧化功能评价试验大鼠体重如表2所示。整个试验过程中，动物生理状态正常。

表2 实验过程中大鼠体重的变化（X±S）
Table 2 The changes of body weight in rats during the experiment（X±S）

由表2可以看出，与空白对照组相比，模型对照组、低剂量、中剂量和高剂量组动物在试验前期、试验中期和试验末期的各个测定时间点上大鼠各组平均质量不存在统计学差异，P＞0.05。

2.2 受试样品对大鼠血清MDA含量的影响

低聚肽和VC复合固体饮料对血清MDA含量的影响如表3所示。

表3 受试样品对大鼠血清MDA含量的影响（X±S，n=10）
Table 3 Effect of test sample on MDA content in serum in rats（X±S，n=10）nmol/mL

注：▲与空白对照组相比，P＜0.05；* 与模型对照组相比，P＜0.05。

由表3可以看出，与空白对照组相比，模型对照组的MDA含量升高，具有显著性差异，有统计学意义（P＜0.05）；与模型对照组相比，受试样品的低剂量MDA含量无统计学差异，中、高剂量组的MDA含量均降低，具有显著性差异，有统计学意义（P＜0.05），因此低聚肽和维生素C复合固体饮料有降低脂质过氧化的作用。

2.3 受试样品对大鼠血清GSH含量的影响

低聚肽和VC复合固体饮料对血清GSH含量的影响如表4所示。

由表4可以看出，与空白对照组相比，模型对照组的血清GSH含量明显降低，并具有极显著差异，有统计学意义（P<0.01）；与模型对照组相比，受试样品各剂量组的血清GSH含量都明显的升高，具有极显著差异，有统计学意义（P<0.01）；因此低聚肽和VC复合固体饮料能够降低血清中GSH含量。

表4 受试样品对GSH含量的影响（X±S，n=10）
Table 4 Effect of test sample on GSH content in serum in rats（X±S，n=10）mg/L

注：▲▲与空白对照组相比，P<0.01；**与模型对照组相比，P<0.01。

2.4 受试样品对大鼠血清蛋白质羰基含量的影响

低聚肽和VC复合固体饮料对大鼠血清蛋白质羰基含量的影响如表5所示。

表5 受试样品对蛋白质羰基含量的影响（X±S，n=10）
Table 5 Effect of test sample on Protein carbonyl content in serum in rats（X±S，n=10）nmol/mg prot

注：▲▲与空白对照组相比，P<0.01；**与模型对照组相比，P<0.01。

由表5可以看出，与空白对照组相比，模型对照组的血清蛋白质羰基含量明显降低，并具有极显著差异，有统计学意义（P<0.01）；与模型对照组相比，受试样品各剂量组的血清蛋白质羰基含量都明显的降低，具有极显著差异，有统计学意义（P<0.01）；因此低聚肽和VC复合固体饮料能够降低血清中蛋白质羰基含量。

2.5 受试样品对大鼠血清SOD活性的影响

低聚肽和VC复合固体饮料对大鼠血清中SOD活性的影响如表6所示。

由表6可以看出，与空白对照组相比，模型对照组血清中SOD活性明显降低，并具有极显著差异，有统计学意义（P<0.01）；与模型对照组相比，受试样品的低、中剂量组血清中SOD活性均升高，但不具有统计学意义，受试样品的高剂量组血清中SOD活性明显的升高，具有极显著差异，有统计学意义（P<0.01）；因此低聚肽和VC复合固体饮料能升高血清中SOD的活性。

表6 受试样品对SOD活性的影响（X±S，n=10）
Table 6 Effect of test sample on SOD activity in serum in rats（X±S，n=10）U/mL

注：▲▲与空白对照组相比，P<0.01；**与模型对照组相比，P<0.01。

3 结论

动物摄入乙醇后，可以促进氧自由基的产生，引起细胞组织被氧化，使得体内的还原性谷胱甘肽被大量消耗[21]。目前常用的衰老模型法主要是灌胃乙醇，当摄入大剂量的乙醇后，血清中超氧化物歧化酶活性下降，丙二醛含量升高[22-23]。在本试验条件下，模型对照组与空白对照组比较，MDA含量升高，GSH含量降低，蛋白质羰基含量升高，SOD活性降低，差异显著或极显著，均有统计学意义，表明成功建立乙醇氧化损伤模型。

给予大鼠受试样品低聚肽和VC复合固体饮料30d后，受试样品的各剂量组均能不同程度上降低MDA含量，其中中、高剂量组与模型对照组相比具有显著性差异（P<0.05）；受试样品各剂量组均显著能降低血清中蛋白质羰基的含量，各剂量组与模型对照组相比均具有极显著差异（P<0.01）；受试样品各剂量组均能不同程度升高血清中SOD活性，其中高剂量组与模型对照组相比具有极显著差异（P<0.01）；受试样品各剂量组血清中GSH含量都不同程度的升高，其中高剂量组与模型对照组相比具有极显著差异（P<0.01）；根据国食药监保化（2012）107号附件1“抗氧化功能评价方法”中结果判定原则，MDA含量、蛋白质羰基含量、SOD活性、GSH含量四项指标中三项指标阳性，可判定该受试样品抗氧化动物实验结果阳性。在本次试验条件下，MDA含量、蛋白质羰基含量、SOD活性、GSH含量四项指标全部都为阳性，因此判定受试样品低聚肽和VC复合固体饮料对SD大鼠具有氧化损伤保护作用。

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YANG Xiao1，WANG Tian1，2，LIU Chang1，HUANG Ying1
（1.Research Institute of Wuhan Twinklife Health Industry Co.，Ltd.，Wuhan 430090，Hubei，China；2.China Health Care Association，Beijing 100142，China）

Abstract：In order to evaluate the protection of oligopeptides and vitamin C compound solid drink on enthanol induced oxidative injury in rats according to the National Food and Drug Administration （2012），No.107，Annex one，"evaluation of antioxidant function"model of ethanol oxidation injury.Rats were randomly divided into 5 groups，the control group，model group，low dose group （0.42 g/kg），medium dose group （0.83 g/kg）and high dose group （2.50 g/kg）.The volume of oral gavage was 10 mL/kg·BW per day，and the control group and model group were filled with distilled water.After 30 days，the oxidative damage model was induced by oral gavage with ethanol except the control group.The content of malondialdehyde （MDA），protein carbonyl，superoxide dismutase（SOD）and reduced glutathione（GSH）in blood were detected.The results showed that the all physiological states of rats were normal during the experiment，oligopeptides and Vitamin C compound solid drink could significantly reduce the content of MDA and protein carbonyl in rats，and it could significantly improve the activity of SOD and raise the content of GSH.The conclusion was that oligopeptides and vitamin C compound solid drink had protective effect in preventing oxidative damage in rats.

YANG Xiao，WANG Tian，LIU Chang，et al.The Antioxidant Properties of Oligopeptide and VCCompound Solid Drink[J].Food Research and Development，2018，39（4）：179-183