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猫和/或犬病原体的PCR检测试剂盒及检测方法和应用与流程

萌宠菠菠乐园
2025-01-01 18:25

技术特征：
1.一种猫和/或犬病原体的pcr检测试剂盒，其特征在于,所述试剂盒包括用于检测犬瘟热病毒的引物及探针、用于检测犬甲型流感病毒的引物及探针、用于检测犬副流感病毒的引物及探针、用于检测犬细小病毒的引物及探针、用于检测犬冠状病毒的引物及探针、用于检测犬轮状病毒的引物及探针、用于检测犬巴贝斯虫的引物及探针、用于检测犬蛔虫的引物及探针、用于检测犬埃立克体的引物及探针、用于检测犬布鲁氏菌的引物及探针、用于检测狂犬病病毒的引物及探针、用于检测伯氏疏螺旋体的引物及探针、用于检测猫疱疹病毒的引物及探针、用于检测猫杯状病毒的引物及探针、用于检测猫细小病毒的引物及探针、用于检测猫冠状病毒的引物及探针、用于检测猫免疫缺陷病毒的引物及探针、用于检测猫白血病病毒的引物及探针、用于检测猫血支原体的引物及探针、用于检测猫支原体的引物及探针、用于检测猫衣原体的引物及探针、用于检测贾第鞭毛虫的引物及探针、用于检测弓形虫的引物及探针、用于检测巴尔通体的引物及探针和中的任意一种或多种；其中，所述用于检测犬瘟热病毒的引物及探针序列为：cf1：5
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agctagtttcatcttaactatcaaatt-3’，cr1：5
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ttaactctccagaaaactcatgc-3’，cp1：5
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fm-acccaagagccggatacatagtttcaatgc-bhq1-3’；所述用于检测犬甲型流感病毒的引物及探针序列为：cf2：5
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agatgagtcttctaaccgaggtcg-3’，cr2：5
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tgcaaaaacatcttcaagtctctg-3’，cp2：5
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hex-tcaggccccctcaaagccga-bhq1-3’；所述用于检测犬副流感病毒的引物及探针序列为：cf3：5
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gcttggcttctttgaaatgg-3’，cr3：5
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gcctgcagaagttccttgtc-3’，cp3：5
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rox-caatcggactagccaagtatggtggga-bhq2-3’；所述用于检测犬细小病毒的引物及探针序列为：cf4：5
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ttcggtaaacttaacaccaac-3’，cr4：5
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ctgtatgttaatatagtcaccca-3’，cp4：5
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fam-ctgcaatttctctgagctta-bhq1-3’；所述用于检测犬冠状病毒的引物及探针序列为：cf5：5
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cagtctagaaatagatctcaatc-3’，cr5：5
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gcttgttctacactgtca-3’，cp5：5
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hex-ccttcttgttattggattgttgccttc-bhq1-3’；所述用于检测犬轮状病毒的引物及探针序列为：cf6：5
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accatctwcacrtraccctctatgag-3’，cr6：5
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ggtcacataacgcccctatagc-3’，cp6：5
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rox-agttaaaagctaacactgtcaaa-bhq2-3’；所述用于检测犬巴贝斯虫的引物及探针序列为：cf7：5
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gtcatcactgtgcctgcgtact-3’，cr7：5
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gcatgacgttgagaccggcaat-3’，cp7：5
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fam-agcgccaggccaccaaggacgct-bhq1-3’；
所述用于检测犬蛔虫的引物及探针序列为：cf8：5
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gctcttgctcatcatcttttc-3’，cr8：5
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gacarccatgcascacctg-3’，cp8：5
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hex-aatgcgtgctacgttgtacttcccaa-bhq1-3’；所述用于检测犬埃立克体的引物及探针序列为：cf9：5
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ttgcaaaatgatgtctgaagatatgaaaca-3’，cr9：5
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gctgctcaaccaagaaatgtatccccta-3’，cp9：5
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rox-agctagtgctgcttgggcaactttgagtgaa-bhq2-3’；所述用于检测犬布鲁氏菌的引物及探针序列为：cf10：5
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ggctggcgcctttgct-3’，cr10：5
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ggcccaggaataacctgcat-3’，cp10：5
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fam-aacttccagaaggac-bhq1-3’；所述用于检测狂犬病病毒的引物及探针序列为：cf11：5
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aagaactttgaggaagagataagaag-3’，cr11：5
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aacacatgaccaacrgcattcgat-3’，cp11：5
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hex-aggagacagctgttcctcactcctat-bhq1-3’；所述用于检测伯氏疏螺旋体的引物及探针序列为：cf12：5
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cgagtcttaaaagggcgatttagt-3’，cr12：5
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gcttcagcctggccataaatag-3’，cr12：5
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rox-agatgtggtagacccgaagccgagtg-bhq2-3’；所述用于检测猫疱疹病毒的引物及探针序列为：ff1：5
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agaggctaacggaccatcga-3’，fr1：5
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gcccgtggtggctctaaac-3’，fp1：5
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fam-tatatgtgtccaccaccttcaggatctactgtcgt-bhq1-3’；所述用于检测猫杯状病毒的引物及探针序列为：ff2：5
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gttggatgaactacccgccaatc-3’，fr2：5
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catatgcggctctgatggcttgaaactg-3’，fp2：5
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hex-tcggtgtttgatttggcctg-bhq1-3’；所述用于检测猫细小病毒的引物及探针序列为：ff3：5
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tggaactagtggcacaccaa-3’，fr3：5
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aaatggtggtaagcccaatg-3’，fp3：5
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rox-caggtgatgaatttgctacagg-bhq2-3’；所述用于检测猫冠状病毒的引物及探针序列为：ff4：5
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gatttgatttggcaatgctagattt-3’，fr4：5
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aacaatcactagatccagacgttagct-3’，fp4：5
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fam-tccattgttggctcgtcatagcgga-bhq1-3’；所述用于检测猫免疫缺陷病毒的引物及探针序列为：ff5：5
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atggggaayggacaggggcgaga-3’，fr5：5
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tctggtatrtcaccaggttctcgtcctgta-3’，
fp5：5
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hex-tactcttsscccctactcctacagca-bhq1-3’；所述用于检测猫白血病病毒的引物及探针序列为：ff6：5
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agttcgaccttccgcctcat-3’，fr6：5
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agaaagcgcgcgtacagaag-3’，fp6：5
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rox-taaactaaccaatccccatgcctctcgc-bhq2-3’；所述用于检测猫血支原体的引物及探针序列为：ff7：5
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acgaaagtctgatggagcaata-3’，fr7：5
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acgcccaataaatccgrataat-3’，fp7：5
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fam-tacgagggataattatgatagtacttcgtga-bhq1-3’；所述用于检测猫支原体的引物及探针序列为：ff8：5
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taaattagctcttgatggtgttcct-3’，fr8：5
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ttcaaagtctttttctggagtttca-3’，fp8：5
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hex-tgagaagaaaaagttatggaattaatggatgca-bhq1-3’；所述用于检测猫衣原体的引物及探针序列为：ff9：5
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gaactgcaagcaacaccactg-3’，fr9：5
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ccattcggcatcttgaagatg-3’，fp9：5
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rox-cgctgccgacagatcaaattttgcc-bhq2-3’；所述用于检测贾第鞭毛虫的引物及探针序列为：ff10：5
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gccctcaagagcctgaacg-3’，fr10：5
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gcgatcgtctccttctcg-3’，fp10：5
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fam-gaccagctcaaccagaa-bhq1-3’；所述用于检测弓形虫的引物及探针序列为：ff11：5
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tcccctctgctggcgaaaagt-3’，fr11：5
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agcgttcgtggtcaactatcgattg-3’，fp11：5
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hex-tctgtgcaactttg gtgtattcgcag-bhq1-3’；所述用于检测巴尔通体的引物及探针序列为：ff12：5
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gctatggtaataaatggacaatgaaataa-3’，fr12：5
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gcttctgttgccaggtg-3’，fp12：5
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rox-accccgcttaaacctgcgacg-bhq2-3’。2.根据权利要求1所述猫犬病原体的pcr检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括pcr反应试剂；所述pcr反应试剂为taqpath
tm 1-step multiplex master mix。3.根据权利要求1所述猫犬病原体的pcr检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样本模板和去离子水；所述样本模板为猫和/或犬的dna和rna。4.根据权利要求1所述猫犬病原体的pcr检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内参引物及探针：用于检测犬的内参基因actb的引物及探针序列为：cf13：5
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gcgcaagtactctgtgtggat-3’，cr13：5
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gtcgtactcctgcttgctgat-3’，cr13：cy5-tcctggcctcactgtccaccttccagca-bhq2-3’；
用于检测猫的内参基因gapdh的引物及探针序列为：ff13：5
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gccatcaatgaccccttcat-3’，fr13：5
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gccgtggaatttgccgt-3’，fp13：5
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cy5-ctcaactacatggtctacatgttccagtatgattcca-bhq2-3’。5.一种猫和/或犬病原体的pcr反应体系，其特征在于，所述猫和/或犬病原体的pcr反应体系为20体积份，包括浓度为10μ、单份为0.8体积份的用于检测犬瘟热病毒的引物及探针、用于检测犬甲型流感病毒的引物及探针、用于检测犬副流感病毒的引物及探针、用于检测犬细小病毒的引物及探针、用于检测犬冠状病毒的引物及探针、用于检测犬轮状病毒的引物及探针、用于检测犬巴贝斯虫的引物及探针、用于检测犬蛔虫的引物及探针、用于检测犬埃立克体的引物及探针、用于检测犬布鲁氏菌的引物及探针、用于检测狂犬病病毒的引物及探针、用于检测伯氏疏螺旋体的引物及探针、用于检测猫疱疹病毒的引物及探针、用于检测猫杯状病毒的引物及探针、用于检测猫细小病毒的引物及探针、用于检测猫冠状病毒的引物及探针、用于检测猫免疫缺陷病毒的引物及探针、用于检测猫白血病病毒的引物及探针、用于检测猫血支原体的引物及探针、用于检测猫支原体的引物及探针、用于检测猫衣原体的引物及探针、用于检测贾第鞭毛虫的引物及探针、用于检测弓形虫的引物及探针、用于检测巴尔通体的引物及探针和中的任意一种或多种；其中，所述用于检测犬瘟热病毒的引物及探针序列为：cf1：5
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agctagtttcatcttaactatcaaatt-3’，cr1：5
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rox-accccgcttaaacctgcgacg-bhq2-3’；和10体积份的pcr反应试剂；和浓度为10m、0.8体积份的用于检测犬的内参基因actb的引物和浓度为10m、0.4体积份的用于检测犬的内参基因actb的探针和/或浓度为10m、0.8体积份的用于检测猫的内参基因gapdh的引物和浓度为10m、0.4体积份的用于检测猫的内参基因gapdh的探针；
所述用于检测犬的内参基因actb的引物和所述用于检测犬的内参基因actb的探针序列为：cf13：5
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cy5-ctcaactacatggtctacatgttccagtatgattcca-bhq2-3’；和2体积份的样本模板；所述样本模板为猫和/或犬的dna和rna；和余量体积份的去离子水。6.一种检测猫和/或犬病原体的非疾病诊断的检测方法，其特征在于，包括：1)采集猫和/或犬的dna和rna；2)配置权利要求5所述猫和/或犬病原体的pcr反应体系，作为待测样本；3)采用实时荧光pcr仪进行pcr分析，采用含尿嘧啶体系，每一循环采集fam、hex、rox和cy5荧光信号。7.根据权利要求6所述检测猫和/或犬病原体的非疾病诊断的检测方法，其特征在于，所述步骤3中进行pcr反应包括在25℃、ung酶激活2分钟；53℃、反转录10分钟；95℃、聚合酶激活2分钟；95℃、3秒，60℃、30秒进行45个循环。8.根据权利要求6所述检测猫和/或犬病原体的非疾病诊断的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中采用magmax
tm
core nucleic acid purification kit+magmax
tm
core mastitis&panbacteria module提取试剂盒采集猫和/或犬的dna和rna。9.根据权利要求6所述检测猫和/或犬病原体的非疾病诊断的检测方法，其特征在于，还包括，以所述步骤2)和所述步骤3)配置空白对照组，并进行空白对照pcr分析，空白对照pcr分析在任一检验通道ct值42之前存在信号，且ct值＜42，或所述待测样本的pcr分析的ct值＞40，则返回所述步骤1)重新检测。10.权利要求1-4任一所述试剂盒在制备猫和/或犬病原体检测试剂中的应用。

技术总结
本发明涉及分子生物医学技术领域，具体涉及一种猫和/或犬病原体的PCR检测试剂盒及检测方法和应用，本发明试剂盒包括用于检测犬瘟热病毒、检测犬甲型流感病毒、犬副流感病毒、犬细小病毒、犬冠状病毒、犬轮状病毒、犬巴贝斯虫、犬蛔虫、犬埃立克体、犬布鲁氏菌、狂犬病病毒、伯氏疏螺旋体、内参基因ACTB、猫疱疹病毒、猫杯状病毒、猫细小病毒、猫冠状病毒、猫免疫缺陷病毒、猫白血病病毒、猫血支原体、猫支原体、猫衣原体、贾第鞭毛虫、弓形虫、巴尔通体和内参基因GAPDH的引物及探针，将采集猫犬DNA和RNA加入该试剂盒，采用实时荧光PCR仪进行PCR反应，每一循环采集FAM、HEX、ROX和CY5荧光信号，进行相关病原体的分析，较传统检测方法特异性更强、灵敏度更高。灵敏度更高。

技术研发人员：伍建姬晓雯庞博
受保护的技术使用者：北京迈基诺基因科技股份有限公司
技术研发日：2021.12.28
技术公布日：2022/4/5