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ALPCO高灵敏度小鼠白蛋白ELISA，确保实验结果的可靠性

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2024-09-16 15:04

ALPCO-小鼠白蛋白ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测量小鼠血清、血浆和尿液中的白蛋白。仅供研究使用。不适用于独立程序。

艾美捷小鼠白蛋白ELISA（ALP-41-ALBMS-E01）检测原理：

双抗体夹心ELISA的原理如图1所示。在该测定中，样品中存在的白蛋白与吸附在聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗白蛋白抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗白蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的白蛋白形成复合物。在另一个洗涤步骤之后，通过添加无色底物3,3'，5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来测定与免疫吸附结合的酶。结合酶的量与被测样品中白蛋白的浓度直接相关；因此，450nm处的吸光度是测试样品中白蛋白浓度的量度。测试样品中白蛋白的量可以从标准曲线中插值，并根据样品稀释进行校正。

程序限制：

当按照试剂盒说明书中的信息完全理解并遵循良好的实验室操作实践时，将获得可靠和可重复的结果。可能影响检测性能的因素包括仪器功能、玻璃器皿的清洁度、蒸馏水或去离子水的质量、试剂和样本移液的准确性、洗涤技术、孵育时间或温度。不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合或替换。

小鼠白蛋白ELISA样本收集和处理：

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。在处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样本出现凝血、严重溶血、脂血，或对样本的完整性有疑虑，请做记录并谨慎解释结果。以下列出的样本收集和储存条件是作为一般指导。尚未评估样本的稳定性。

血清样本：应通过静脉穿刺收集血液。血液凝固后，应通过离心分离血清。取出血清并立即检测或分装样本并储存在-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

血浆样本：应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即检测或分装样本并储存在-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

尿液样本：使用无菌或干净的尿液收集器收集中段尿液。离心以去除细胞碎片。立即检测或分装样本并储存在-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

已知干扰物质：浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

样本稀释：

检测要求在使用前对每个测试样本进行稀释。每次进行检测时，所有样本都应以双份进行检测。推荐的稀释只是建议。稀释应基于未知样本的预期浓度，以便稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本值，在运行整个板之前，高度建议对一个或两个代表性样本进行系列稀释检测。

血清和血浆样本：建议的起始稀释度为1:500,000。要准备样本的1:500,000稀释液，将2微升样本转移到1998微升1X稀释液中。这会产生1:1,000的稀释度。接下来，将1:1,000的样本通过将2微升转移到998微升1X稀释液中进行稀释。这会产生1:500,000的稀释度。在每个阶段彻底混合。

尿液样本：建议的起始稀释度为1:500。要准备样本的1:500稀释液，将2微升样本转移到998微升1X稀释液中。这会产生1:500的稀释度。彻底混合。

小鼠白蛋白ELISA结果计算：

1. 从所有孔的测试值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。

2. 对每个标准的平均重复读数取平均值，并使用这些结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑（4-PL）曲线拟合的计算机软件来减少数据，构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合；然而，它们对数据的拟合将不够精确。

3. 从标准曲线中插值测试样本值。根据稀释因子进行校正，以得出原始样本中的白蛋白浓度。

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