血液学实验室检查(一)------血涂片制备及染色
1. 血涂片制备及染色
制备血涂片:血液在抗凝剂中放置时间过长会导致形态改变,抽完血之后需立即制备血涂片
2. 染色:目前宠物医院常用的染色液包括瑞氏吉姆萨染色,Diff-Quik染色(迪夫快速染色),网织红细胞染色(新亚甲蓝染色)
(1)瑞氏-吉姆萨染色和Diff-Quik染色都属于罗曼诺夫斯基染色,在该种染色情况下,蛋白等嗜酸性物质会被染成红色,细胞核等嗜碱性物质会被染成蓝紫色。
两种染色方法比较:
同一只犬血涂片瑞氏吉姆萨染色(A)及Diff-Quik染色(B)(100X,油镜),在瑞氏吉姆萨染色下多染性红细胞很容易被识别出来(箭头),Diff-Quik染色下不太容易识别出多染性红细胞。图片来源:联宠国际检测中心
同一病例不同染色方法:A, 犬肥大细胞瘤. (瑞氏染色, 600×.) B, 犬肥大细胞瘤(Diff-Quik染色600×)图片来源《Diagnostic Cytology and Hematology of the Dog and Cat》
(2)新亚甲蓝染色(网织红细胞染色)
新亚甲蓝染色主要应用于一些贫血病例,通过新亚甲蓝染色,可以大概评估骨髓的再生反应情况。网织红细胞是一种幼稚的红细胞,胞浆里面有残存的RNA(在新亚甲蓝染色情况下会呈现蓝紫色的物质),是反应骨髓再生反应的重要指标。在新亚甲蓝染色情况下,与成熟的红细胞相比,网织红细胞中可见嗜碱性物质。
此外新亚甲蓝染色还可使海因茨小体着色更加突出,对于怀疑存在海因茨小体的病例,可以更好的评估。
犬网织红细胞(新亚甲蓝染色,100X,图片来源:联宠国际检测中心)
犬海因茨小体(Diff-Quik染色,100X,图片来源:联宠国际检测中心)
建议:
1. 无论是进行血液学检查还是细胞学检查,至少一张玻片是用瑞士吉姆萨染色,这样可以更好的观察多染性红细胞,核仁等,也能排查肥大细胞。
2. 显微镜排查血液寄生虫的玻片可以用Diff-Quik进行染色,减少沉渣的干扰
3. 及时更换染液防止沉渣对观察造成的干扰
4. 怀疑存在微生物的涂片(如粪便涂片,脓性渗出物涂片)尽量避免浸染,以防污染染液,可采用滴染的方式。
备注:
罗曼诺夫斯基染色液是由伊红(酸性染料)和亚甲基蓝(碱性染料)组成,碱性物质(如血红蛋白)与伊红(酸性染料)结合被染成红色(常称为嗜酸性物质),酸性物质(如细胞核)与亚甲基蓝(碱性染料)结合被染成蓝色或紫色(常称为嗜碱性物质)。
网织红细胞染色液主要成分是新亚甲蓝
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