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脑声常谈丨啮齿动物飞溅测试（Sucrose Splash Test, SST）是什么？

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2024-10-25 15:55

啮齿类动物是研究疾病常见的一种模式动物。自我修饰，也称理毛行为，是啮齿类动物与生俱来的清理行为，是一种复杂且刻板的序列性运动。啮齿类动物在清醒状态下，约40%的时间会用于自我修饰。这种梳理行为一般从头部开始，经过身体过渡到生殖器和尾部，有保持毛发和皮肤清洁、调节体温和情绪等功能。在啮齿类动物中，冷漠的表现是巢穴形成受损、自我护理受损导致毛发蓬乱、母性护理不足、社交兴趣下降和对新奇事物的兴趣下降，这些被认为是抑郁表型。

评估啮齿类动物动机和自我保健行为的方法之一是飞溅测试（Sucrose Splash Test, SST）。在动物背毛上喷洒 10% 蔗糖溶液后5分钟内记录梳理的频率和持续时间，通常是在其饲养的笼子中。蔗糖溶液的粘度模仿啮齿动物皮毛上的污垢，并通过舔或抓来触发梳理。喷洒和开始梳理之间的时间延迟以及梳理频率的减少被认为是与抑郁样表型相关的动机和自我护理行为的减少。理毛行为异常可见于多种疾病模型，如孤独症、强迫症、精神分裂症等啮齿类动物模型均发现理毛时间增加，且与模型的情绪障碍有密切关系。该行为是评估多种精神疾病小鼠模型情绪状态敏感的行为学指标。SST的目的是评估动物的抑郁样行为，该测试是通过将10%蔗糖溶液喷洒在啮齿动物身体的背表面上进行的，并通过舔、咬或抓毛来清除溶液来测量梳理行为。在蔗糖溶液蒸发后五分钟内记录启动梳理行为的潜伏期以及梳理的频率和持续时间。在这种飞溅测试的情况下，蔗糖溶液因其粘度而被选为释放剂和持久的梳理因素，该范式主要在抑郁造模后评估动物行为变化。

实验步骤

抑郁造模结束后，将10%的蔗糖水连续3次喷于小鼠背部靠近尾端处，之后放入小鼠原本居住的笼中记录5 min内小鼠的梳洗时间（小鼠梳洗背部喷洒糖水位置的行为时间记为梳洗时间），于取材前1周进行测定。该测试用于评估应激和非应激小鼠的梳理行为，梳理是通过舔或抓来清洁动物的皮毛。

梳理行为特点

小鼠梳理自身毛发时，涉及主要部位有前肢、头面部、身体侧腹、后肢以及生殖器/尾部。一般来说小鼠的理毛行为有一定序列性，通常由头部向身体和尾部梳理。序列第一阶段小鼠用两侧前爪围绕鼻子做小范围椭圆形划动，即清理前爪和鼻子; 第二阶段用单侧前爪在眼部周围做椭圆形划动，即清理面部; 第三阶段用两侧前爪从耳后向下划动，即清理头部，两侧前爪伸展幅度可能不同; 第四阶段用嘴巴和前爪梳理身体毛发，即清理身体; 第五阶段用嘴巴和前爪清理生殖器区域和尾部。序列性理毛行为占理毛行为的 10% -15% ，而小鼠大多数理毛行为表现出更为灵活的随机性。本实验中观测的理毛行为即上述行为活动中，从头至尾的完整序列和灵活无序的一个或多个阶段。理毛行为常用指标包括梳理的回合数和持续时间。梳理的回合数即次数，从1个回合的开始到结束记为1次; 小鼠从静止转向理毛的某个阶段的时刻记为1个回合开始; 如果小鼠在理毛时，某一时刻起动作变为静止且静止时间超过6 s，记为1个回合结束; 如果小鼠在理毛时发生移动，如走、跑、跳跃或嗅探等动作中断了理毛行为，记为1个回合结束。理毛的持续时间即单个回合持续时间的总和。根据记录到的理毛回合数和持续时间计算每个回合的平均理毛时间。

Fig1 小鼠梳理行为视频采集装

表1 荆芥挥发油对CUMS模型小鼠行为学表现的影响

Fig2 飞溅试验评估慢性氟西汀治疗（10 mg/kg，口服，14 天）对嗅球切除小鼠的快感缺乏样行为发展的影响

飞溅实验中小鼠梳洗时间缩短，表明CUMS模型小鼠出现行为学异常。

评估参数

梳理行为表明抑郁症状，以秒为单位的时间来衡量。梳理行为的时间越短，抑郁程度越高。记录的梳理行为包括鼻子/脸部梳理（沿着鼻子抚摸）、洗头（在头顶和耳朵后面的半圆形运动）、身体梳理（舔身体皮毛）使用整理器记录梳理频率，即5分钟内舔舐的次数。记录蔗糖溶液蒸发后 5 分钟内梳理毛发的频率和持续时间，在图形中将梳理行为的数量显示为总频率。

文献引用

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