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实验动物镇静、麻醉和止痛（含方案，符合伦理，非管控药，效果好）

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2024-10-28 23:59

1目的：规范实验动物镇静剂和止痛剂的使用。使动物实验符合“优化”原则，确保实验动物受到人道的对待，尽可能减少动物在实验中的疼痛和痛苦。活体动物的手术、解剖、创伤性或可引起严重疼痛和痛苦的实验操作或实验观察，均应进行有效的镇静、麻醉和止痛措施。

2优化（refinement），使用实验动物时,尽量减低非人道方法的使用频率或危害程度。

疼痛（pain）表示与实际或潜在的组织损伤相关的不愉快的感觉和情感体验。

痛苦（suffering）多种有害刺激和/或缺少重要的积极刺激对动物造成的不偷快不受欢迎的状态。

3.总则：在动物实验中, 有效的镇静、止痛和麻醉不仅是保证实验顺利进行方法学上的关键环节, 也是保证实验动物福利的一项基本要求，根据科研目的选择恰当的镇静和止痛药物是顺利进行动物实验的重要前提。镇静、止痛和麻醉操作，应该既要保证实验操作顺利进行, 保证获得的实验数据准确可靠, 又要能将实验动物遭受的痛苦降至最低，保证动物的生命体征、呼吸、循环等生理功能稳定,具体方案的实施要与动物的年龄、品系、健康状况和受到伤害程度相适应；方案要容易操作，安全、且能重复；不影响操作人员的健康和安全，对环境无污染或无有害影响；所用设备方使易得,便于维护适合；经济适用。

镇静、止痛和麻醉的使用指标

疼痛分级：

对实验动物疼痛分级标准将实验动物所承受的疼痛分为B、C、D、E四个目录（见表1 ）。处于繁殖保种阶段的动物可以被列为目录B，但是当动物被实施任何操作时（包括安乐死）都应该列为目录C或更高。

在涉及C类以及D类动物科研项目中，项目组在提交实验动物研究及使用计划的伦理审查时，应对存活手术或操作过程进行详细的描述，经过IACUC批准后方可实施相关操作。

在涉及到E类动物科研项目中，项目组在提交《实验动物研究及使用计划》的的伦理审查时，对实验中存在导致动物疼痛的过程，但是不可以使用麻醉剂或止痛药物对动物进行疼痛缓解的情况，应对免除止痛措施的科学依据详细说明。经过IACUC批准后方可实施相关操作。

表1：动物疼痛分级

（“AVMA不允许的安乐死方法”，是国标中的“不推荐”但IACUC批准后可用的方法，）

实验预期的动物疼痛或痛苦发生时，需要用标准的兽医治疗或缓解疼痛的措施；在某些情况下，不能使用标准的兽医治疗或缓解疼痛的措施，因为这样的措施可能会危及实验的完整性的研究。

镇静与麻醉的操作

4.1 规程

从给药到动物清醒必须对动物进行实时监护。麻醉的动物会反应迟钝、无方向感，所以麻醉时应将动物放置笼中或采取适当的措施防止动物造成损伤。期间应注意对小型啮齿动物采取适当的保温措施，如电热毯，防止动物体温降低，又要防止加温导致体温过高。

4.2对手术麻醉深度的检测

如果动物有翻身反应或对疼痛和刺激发生反应，如表现蠕动、移动、收回肢体，则手术必须延迟进行或追加药物剂量。

深度疼痛测试，用手指挤压动物的后肢脚趾，如果动物有反应如缩回后肢，则动物意识未完全消失；如果动物对测试无反应，则为无意识或意识消失，麻醉达到手术要求，可以开始手术。

外科手术开始时，动物应充分松弛、对疼痛刺激无反应、监控呼吸和心率等指标，无明显异常。如果脏器长时间暴露，应适当滴加温性的生理盐水，防止粘膜发干；眼部周围可以涂抹润滑的眼膏，减少由于眼部干燥引发的术后不适。

4.3 设施

在动物房或手术室实施麻醉。但麻醉时应尽量不要在其它动物感知到的区域进行。操作现场不要有无关人员。对于老弱、危重症及重大损伤性手术和实验操作的动物，应用全身麻醉药时需人工或设备全程监测其呼吸、循环及瞳孔反射等情况，避免因麻醉过深而死亡。存活性实验或手术操作结束后，应有完善的复苏及监护过程。

4.4药物选择

遵守《中华人民共和国药品管理法》、《麻醉药品和精神药品管理条例》、《兽药管理条例》、《兽用麻醉药品的供应、使用、管理办法》、《兽用处方药和非处方药管理办法》等相关法律法规，防止麻醉药品和精神类药品药物滥用，避免人用药物制剂给实验动物使用，使用正规兽药。

如果因实验需要，使用非药物级试剂，如人用或兽用原料药、分析级散装化学品试剂等，应参照《实验动物福利：非药物级化合物使用指南》，并获得IACUC批准。药物级别化合物的不可用和短缺、新变量引入等，是IACUC决定是否能成为使用非药物级别化合物的理由。仅为了节约成本不是使用非药物级别化合物的理由。非药物级试剂中乌拉坦、氯醛糖毒性较大，一般不用于存活动物的麻醉，非药物级的戊巴比妥钠一般不用于存活动物的麻醉。三溴乙醇不要对大、小鼠反复腹腔注射给药，否则容易造成腹膜炎。

避免使用麻醉效果较差、刺激性强、毒副作用较大的麻醉剂。目前认为水合氯醛适合于催眠而非麻醉，物手术所需麻醉剂量的水合氯醛不能提供足够的镇痛作用，还会导致显著的呼吸抑制。水合氯醛具有很强的刺激性，腹腔注射可能会造成肠梗阻、腹膜炎以及胃溃疡等，水合氯醛对实验动物还具有致突变和致癌作用。因此不推荐存活动物实验使用水合氯醛腹腔麻醉，也不推荐水合氯醛用于安乐死。

对怀孕动物进行全身麻醉时，尽量缩短麻醉时间，并选用对胎儿影响较小的药物。不宜使用丙泊酚。

4.5实验动物突发麻醉意外时的抢救。

如发生呼吸停止或心跳停止的，可选用阿托品0.1mg/kg，静脉或肌肉注射。也可以选择1:1000肾上腺素0.1mg/kg，静脉或肌肉注射，但是麻醉方案中用赛拉嗪或右美托咪定，不可用肾上腺素抢救，但可以用拮抗剂陆醒宁或咹啶醒抢救。静脉注射30mg/kg的尼可刹米兴奋呼吸中枢。同时按压胸部做心肺复苏。

5.常用的镇静、麻醉操作推荐方法

5.1麻醉气体乙醚或CO2诱导啮齿动物麻醉

乙醚或CO2诱导密闭容器内的啮齿动物，使之短暂的失去意识，限用于某些实验，如眼眶后静脉丛采血和一些注射。

动物的诱导时间内严格观察动物状态，以免过量导致意外。追加麻醉气体诱导时，不可以连续超过2次。眼眶后静脉丛采血时，可先滴入盐酸丙美卡因，局麻可以使动物减少对操作的敏感性并延长动物失去意识的时间，先于采血前眼睛用薄纸擦拭以除去残余的盐酸丙对卡因。动物一恢复意识就放回原笼中。乙醚易燃易爆，平时要严格按规定进行保存管理，操作需要在通风橱中进行。使用CO2麻醉箱的操作，在通风良好的室内进行。

5.2小鼠和大鼠的非吸入途径麻醉与镇静，具体见表2

表2小鼠和大鼠的非吸入途径麻醉与镇静

注意事项：

a.盐酸赛拉嗪注射液，不同生产尚的麻醉剂量不相同，更换厂家时注意调整用量。

b.大、小鼠，是否使用阿托品麻醉前给药，有争议。阿托品有抗胆碱作用，在麻醉前，用0.04mg/kg阿托品给小鼠皮下或腹腔注射，0.05mg/kg阿托品给大鼠皮下或腹腔注射，好处是能减少唾液和呼吸道分泌物，阻止血管迷走神经反射，预防心率或血压降低过多，坏处是抑制消化功能。赛拉嗪与舒泰合用的方案，动物的唾液和呼吸道分泌物较多，可以在麻醉前10分钟用阿托品给药。而右美托咪定、丙泊酚本身能抑制唾液和呼吸道分泌物，不建议阿托品麻醉前给药，在实验中心率血压较低时，可以使用阿托品。

c.只使用舒泰，对大鼠镇痛作用不强，尤其是头部手术，而且舒泰能加重炎症和活性氧化作用，对神经系统小胶质细胞有一定损害，舒泰需要与其他镇静镇痛药物联合使用，以加强疗效，减少副作用。丙泊酚的镇痛作用微弱。利多卡因少量地全身给药有镇痛作用，是目前极少易得到的专用镇痛兽药，与一些镇痛作用的镇静剂配合，联合镇痛效果较好，另外利多卡因还有稳定心率的作用。兔、狗、鼠适合用利多卡因少量全身给药，猫的全身给药镇痛剂量有心脏毒性。

d.目前的方案，对小鼠镇痛的效果均不强。

e.大鼠和小鼠在麻醉前不需要禁食或禁水。如果因实验需要麻醉前长时间禁食，需由IACUC批准。任何时候不得禁水。

5.3家兔的非吸入途径麻醉与镇静

表3家兔的非吸入途径麻醉与镇静

注意事项：

A.赛拉嗪和其他药物（舒泰、丙泊酚等）合用，很容易导致兔心律失常，甚至死亡。推荐用右美托咪定代替赛拉嗪。

B.家兔体内有阿托品酯酶，因此麻醉前阿托品给药，控制麻醉的副作用不理想，还容易造成家兔术后消化不良。不推荐使用阿托品。

C.舒泰使用量稍大，就会造成兔的肾损伤，因此舒泰在复合麻醉中必须用很小的量。

D.给药时的固定器具，应结构合理、规格适宜、坚固耐用、环保卫生、便于操作。对动物身体的强制性限制宜减少到最低程度。

E.兔在麻醉前不禁食或禁水。如果因实验需要麻醉前长时间禁食、水，需由IACUC批准。

F.肌肉注射麻醉，需要在腰部肌群进针注射，不可选择臀部或腿部肌肉。

5.4鱼的沉浸麻醉具体见表4

表4 鱼的镇静、麻醉、止痛和诱导麻醉药物的选择

注：1.苯佐卡因配置：首先200 mg苯佐卡因+5 ml 丙酮，进行溶解，再加入8 L 水配置成25ppm(25mg/l)的苯佐卡因。

5.4 实验动物的止痛

解热镇痛消炎药对切割等锐痛的镇痛不理想，在不影响实验结果的前提下，可以用于缓解动物的术后痛或炎症性疼痛。安乃静对炎症影响相对较弱。具体见表5.

表5 实验动物的止痛

6.实验动物医师的作用

实验动物医师在动物外科手术、麻醉技术、技术操作以及管理方面应取得资格认证。实验动物医师负责麻醉、止痛、镇定以及安乐死的操作的专业指导或实施。实验动物医师有责任依法正确使用、保管麻醉品。应接受化学危险品安全使用的培训。

实验动物医师应在动物麻醉、镇痛、镇定操作时，对所采用的方法进行有效的监督。手写记录文件。记录应该包括但不仅局限于以下几点：IACUC动物使用和管理方案编号，麻醉日期、时间，使用的麻醉剂、止痛剂或镇静剂名称、剂量、给药途径；监测生理参数如心率、呼吸次数/节律、体温、粘膜色泽和足部的松弛度等（如果需要）。

（不涉及戊巴比妥钠、氯胺酮、吗啡等麻醉与精神类药品的麻醉方法和抢救方法）

附：

大、小鼠，可用异氟烷直接吸入麻醉。诱导：4-5%异氟烷，维持：1-3%异氟烷。

家兔用气体麻醉，虽然也可以，但家兔喉门窄，很难做气管插管，大多使用面罩。就算有空气回收，麻醉气体泄露也会弄的实验室气味特别大。做一天手术，回家最好别开车了，太影响注意力。

犬的方案，舒泰7.5-25mg/kg，肌肉注射，麻醉并轻中度镇痛，头部手术镇痛不好。

有的说舒泰可以搭配乙酰丙嗪、氯丙嗪等，但也有人说这样对心血管和体温影响太厉害。

宠物医院麻醉犬一般都是用气体麻醉或注射与吸入麻醉复合。这和实验室还不一样。实验室都是健康的实验用动物，宠物医院都是患病动物，气体麻醉相对比较安全，对肝肾影响小。

还有朋友问小型猪的麻醉方法。我目前的职业生涯，就看过一次小型猪的麻醉。确实没有这方面经验，把一些机构的方法汇总一下。