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检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条的制作方法

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2024-11-14 19:42

专利名称：检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条，该检测试纸条主要是针对猫毛、狗毛过敏的免疫胶体金层析检测，适用于家庭自检。
背景技术：
过敏性疾病是现代社会中最常见的一种疾病，是机体受抗原物质(也称变应原或过敏原)刺激后，引起的组织损伤或生理功能紊乱。而宠物皮屑(如猫毛、狗毛)是重要的过敏原之一。当机体再受同类过敏原刺激时，过敏原使人体内IgE分子交联，引起嗜碱性粒细胞和肥大细胞脱颗粒释放组胺、白三烯、细胞因子等生物活性物质，使机体产生过敏反应、导致机体毛细血管扩张、水肿、平滑肌痉挛、内分泌亢进等过敏症状。根据美国宠物产品制造商协会APPMA的统计，近三分之二的美国家庭拥有至少一只宠物。中国大约有7000到8000千万宠物爱好者，这是国家统计局2007年的一个统计数据，并不包括农村和无法统计的养宠物人数.比例估计是1 5。因此，在养宠物之前，进行宠物过敏的检测是非常有意义的，早诊断，早预防。对于宠物过敏目前无特别的治疗方法，严格避免接触宠物是最有效的方法。常用的检测过敏原方法有体内过敏原点刺试验、体外检测特异性IgE抗体。体内检测假阳性高并受药物的影响，现行的体外检测如酶联免疫吸附试验(ELISA)试验步骤多、时间长。而免疫胶体金层析技术是20世纪80年代发展起来的快速免疫分析方法。其原理是以条状纤维层析材料为固相，借助毛细作用使样品溶液在层析条上泳动，同时使样品中的待测物与层析材料上的受体(金标抗体)发生高特异性、高亲和性的免疫反应，层析过程中免疫复合物被富集或截留在层析材料的检测带上，胶体金聚集形成明显条带，5-lOmin内便可得到直观的结果。省去了繁琐的加样、洗涤、孵育等步骤。因而这种分析技术操作简单快速，分析结果清楚，易于判断，无需仪器设备，成本低廉，适用于家庭自检。目前市场上还没有出现检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条。
发明内容本实用新型的目的是提供一种使用方便、快速检测人血清或鼻分泌物中的检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条。本实用新型为解决上述提出的问题所采用解决方案为检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条，其特征在于包括有样本垫、胶体金试剂垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、粘胶层和聚苯乙烯底板，硝酸纤维素膜上设置有质控线和检测线，聚苯乙烯底板上通过粘胶层连接有硝酸纤维素膜、吸水垫和胶体金试剂垫，胶体金试剂垫上还连有样本垫，其中胶体金试剂垫中喷有胶体金标记的鼠抗人IgE，质控线为兔抗鼠IgG，检测线为标准化变应原。按上述方案，还包括有一 PVC外壳，所述的PVC外壳包括有壳体，壳体上对应样本垫处设置有滴入孔，壳体上对应质控线和检测线处设置有观察孔。本实用新型具有如下特点(1)本实用新型使用鼻分泌物检测，对人无创伤；(2)操作简单、方便，5-15分钟完成全部检测；(3)敏感度高、特异性强；(4)检测成本较低，便于推广和使用。

图1是本实用新型的整体结构示意图；图2为图1的侧视图；图3为PVC外壳的结构示意图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本实用新型做进一步的说明，但是此说明不能构成对本实用新型的限制。如图1-2所示，检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条，包括有样本垫2、胶体金试剂垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫1、粘胶层7和聚苯乙烯底板8，硝酸纤维素膜上设置有质控线5和检测线6，聚苯乙烯底板上通过粘胶层连接有硝酸纤维素膜、吸水垫和胶体金试剂垫，胶体金试剂垫上还连有样本垫，其中胶体金试剂垫中喷有胶体金标记的鼠抗人 IgE，质控线为兔抗鼠IgG，检测线为标准化变应原，如图3所示，还可以包括有一与试纸条相配的PVC外壳，所述的PVC外壳包括有壳体11，壳体上对应样本垫处设置有滴入孔9，壳体上对应质控线和检测线处设置有观察孔10。本实用新型的制备方法1.变应原的制备用梳子梳理动物毛皮，将梳理下来的毛发皮屑用2倍丙酮溶剂浸泡2小时，期间经常搅拌，倒掉溶剂，将挥发除尽的脱脂后的粉末以1 20(w/v)的量加入0.3mol/l的碳酸氢钠_氯化钠缓冲液(PH8. 2)，含0. 01%叠氮钠的提取液中，磁力搅拌器转速250转分钟，置于冰箱4°C过夜。取上清液-20°C下保存。2.制备胶体金称取0. Olg氯金酸加到IOOml超纯水中，加热至沸腾后加入Iml 柠檬酸三钠溶液，加热煮沸8min，获得透明、酒红色的胶体金溶液。3.胶体金标记蛋白质边搅拌边逐滴加入蛋白溶液(抗体)至胶体金溶液中，将待标记的抗体蛋白Img 加入IOOml胶体金溶液中混合，室温搅拌30min ；边搅拌边逐滴加入IOmg牛血清白蛋白 (BSA)，继续搅拌lOmin，静置过夜；于8000r/min，4°C下离心45min ；吸取上清液，将沉淀溶于2ml磷酸缓冲液中，备用，也可加甘油混勻于-20°C保存；4.喷样选用millipore公司的中等流速的硝酸纤维膜。蛋白浓度为2mg/ml的标准化变应原以及兔抗属IgG蛋白(质控)用5-50Mm的PBS进行1 30的稀释。将稀释后的变应原及兔抗属IgG蛋白(质控)各IOOul加到喷样储液瓶内，应用微量喷膜机(BioDot)Jf 变应原溶液喷线于硝酸纤维膜的相应位置，喷墨的体积控制在lul/cm，喷样结束后，室温真空抽干或37°C干燥2小时，使抗体牢固的结合在硝酸纤维膜的表面。喷样后的膜应保存于 4°C、干燥的环境，封闭时用2% BSA封闭液，于保湿盒内，37°C下保温1小时；[0023]5.试纸条制备喷样结束后，将胶体金试剂垫、吸水垫和硝酸纤维膜通过粘胶层固定连接于聚苯乙烯底板上，并在胶体金试剂垫上贴上样本垫组成检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条。采用切割机将复合好的膜片切成所需的形状和规格，制成完整的检测装置，将其装于含有干燥剂的铝箔袋中。本实用新型的使用方法(1)收集检测样本；(2)将试纸条有箭头的一端浸入被检测的鼻分泌物样本中；(3)3-5秒后取出试纸条，平放。5-10分钟内观察结果。出现两条红线(检测线和质控线)，表明过敏原阳性；仅出现一条质控线，则表明过敏原阴性。仅出现一条检测线，应重新检测。
权利要求检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条，其特征在于包括有样本垫(2)、胶体金试剂垫(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(1)、粘胶层(7)和聚苯乙烯底板(8)，硝酸纤维素膜上设置有质控线(5)和检测线(6)，聚苯乙烯底板上通过粘胶层连接有硝酸纤维素膜、吸水垫和胶体金试剂垫，胶体金试剂垫上还连有样本垫，其中胶体金试剂垫中喷有胶体金标记的鼠抗人IgE，质控线为兔抗鼠IgG，检测线为标准化变应原。
2.按权利要求1所述的检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条，其特征在于还包括有一 PVC外壳，所述的PVC外壳包括有壳体(11)，壳体上设置有滴入孔(9)和观察孔 (10)。
专利摘要本实用新型涉及一种检测宠物过敏的免疫胶体金层析检测试纸条，该检测试纸条主要是针对猫毛、狗毛过敏的免疫胶体金层析检测，适用于家庭自检，包括有样本垫、胶体金试剂垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、粘胶层和聚苯乙烯底板，硝酸纤维素膜上设置有质控线和检测线，聚苯乙烯底板上通过粘胶层连接有硝酸纤维素膜、吸水垫和胶体金试剂垫，胶体金试剂垫上还连有样本垫，其中胶体金试剂垫中喷有胶体金标记的鼠抗人IgE，质控线为兔抗鼠IgG，检测线为标准化变应原。本实用新型具有如下特点(1)本实用新型使用鼻分泌物检测，对人无创伤；(2)操作简单、方便，5-15分钟完成全部检测；(3)敏感度高、特异性强；(4)检测成本较低，便于推广和使用。
文档编号G01N33/558GK201654043SQ201020133558
公开日2010年11月24日申请日期2010年3月16日优先权日2010年3月16日
发明者尹玉敏, 梁智辉, 梅亚红, 王帮洲, 祝戎飞, 陈建军, 陈琰, 龚镇奎申请人:湖北楚冠生物药业有限公司