观赏鱼中两种寄生四膜虫的鉴定及其感染机制研究
观赏鱼中两种寄生四膜虫的鉴定及其感染机制研究
现今由寄生虫引起的疾病在淡水养殖行业中愈发受重视,而纤毛虫原生动物病原可对世界水产养殖业造成严重损失。我国常见的纤毛虫病害是小瓜虫、盾纤类纤毛虫和车轮虫,四膜虫感染发现较晚,在世界范围内关于四膜虫病害全面的系统研究较少。四膜虫是一种原生动物纤毛虫,是引起黑龙江观赏鱼四膜虫病的病原体。本研究从哈尔滨观赏鱼市场观赏鱼鱼体内分离四膜虫,并对其进行培养,活体观察、利用扫描电镜、各种银染色方法(蛋白银染色和氨银染色)、DNA提取及测序、序列比对和系统学分析对寄生性四膜虫的形态学结合系统发育学进行研究;设计针对梨形四膜虫的具荧光标记的寡核苷酸靶向SSU-r RNA探针,并采用荧光原位杂交(FISH)技术进行优化四膜虫探针设计和阴阳性检测。在以上工作基础上进行HE染色、扫描电镜观察、和感染实验对四膜虫在观赏鱼体内的感染模式进行初步研究,探讨其病理特征和感染机制。主要成果包括如下:(1)从病鱼体内分离出两种兼性寄生四膜虫,贪食四膜虫Tetrahymena vorax(Kidder,LillyClaff,1940)Kidder,1941和梨形四膜虫Tetrahymena pyriformis(Ehrenberg,1830)Lwoff,1947。研究其形态学特点和系统分类学地位,进而对引起哈尔滨观赏鱼市场中四膜虫病的病原进行了准确鉴定并进行报道,这是我国关于四膜虫病的首次报道。(2)观赏鱼中两种四膜虫病的病理特征基本相同:患病的鱼在皮肤上分泌大量粘液,体表有白色病变,鱼鳍受损,鳃丝和肌肉组织变形、收缩和破裂。受感染的器官还包括眼眶周围区域和内脏等等,显示为全身感染。结果表明,四膜虫通过感染各个器官,破坏鱼体组织,导致鱼体丧失功能甚至死亡。(3)体表的白色病变是以往研究中的典型四膜虫病理特征,然而在本研究中,观赏鱼体表是否出现白色病变以及各种脏器的寄生感染程度大小,与观赏鱼的种类有关。(4)感染实验结果表明,皮肤受伤和较大的感染剂量可导致较高的感染率和较高的死亡率,皮肤和黏液是四膜虫侵染的起始部位,四膜虫通过皮肤进入肌肉,进而到达内部器官和循环系统。(5)首次针对水产养殖中引起四膜虫病的高危性纤毛虫—梨形四膜虫,设计了一种荧光标记的SSU-r RNA靶向寡核苷酸探针,并与荧光原位杂交技术相结合,以达到对梨形四膜虫快速鉴定的目的。本工作以黑龙江省观赏鱼养殖业中四膜虫病为着手点进行研究和全面深入剖析,可为东北观赏鱼养殖中纤毛虫病害的防治提供一定理论参考,亦为世界范围内四膜虫病的防治提供理论基础。
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