一种宠物保健品及其制备方法与流程

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• 2024-12-02 09:56

本申请涉及宠物食品技术领域，特别涉及一种宠物保健品及其制备方法。

背景技术：

随着经济的增长，宠物行业得到了迅猛的发展，市面上的宠物食品也是良莠不齐。由于宠物食品品质，决定了宠物的营养摄入，并关系着宠物的健康；良好的饮食是保证宠物健康的根本，选择好宠物的食物用品对它们来说是非常关键的。研究表明，衰老、免疫力低下的宠物都会比较容易感染到疾病，要想提高爱宠的免疫力，除了应注意卫生的饲养习惯，还有就是要给宠物喂饲专业的宠物食品。目前，传统宠物配方食品或者处方粮缺少真正具有功效性的产品，大多数以维生素e等传统抗氧化的原料为主；或是围绕各种微量元素的添加的原料为主。因此，研制一种有利于延缓衰老、增强免疫力的宠物保健品具有重要意义。

技术实现要素：

为了解决上述技术问题，本申请提供了一种宠物保健品及其制备方法，所述宠物保健品有利于改善肠道，提升细胞活力，促进代谢，和延缓衰老的功效。

第一方面，本申请提供了一种宠物保健品，含有如下重量百分比的组分：β-1,3葡聚糖0.01-50％和烟酰胺单核苷酸(nmn)0.01-50％。

可选地，所述β-1,3葡聚糖和所述烟酰胺单核苷酸的质量比为1：(1-100)。

可选地，所述β-1,3葡聚糖和所述烟酰胺单核苷酸的质量比为1：(1-50)。进一步地，可选地，所述β-1,3葡聚糖和所述烟酰胺单核苷酸的质量比为1：(2-10)。例如，所述β-1,3葡聚糖和所述烟酰胺单核苷酸的质量比具体为1：(1-5)、1：(1-10)、1：(2-30)、1：(1-30)、1：(1-40)、1：(1-50)、1：(1-60)、1：(1-70)、1：(1-80)、1：(1-90)或1：(1-100)。

本申请中，所述宠物保健品组合物，能够有效维持肠道健康，宠物保健品中的β-1,3葡聚糖和烟酰胺单核苷酸发挥协同作用，β-1,3葡聚糖可以显著提高抗氧化指标，从而提高宠物的免疫力延缓衰老；烟酰胺单核苷酸为细胞提供能量源atp，增强代谢和细胞更新，有利于进一步促进葡聚糖的吸收和功能的实施；烟酰胺单核苷酸自身也有延缓衰老的功能，搭配葡聚糖后功能提升；使整个宠物保健品可以表现出更突出的抗衰老功效。

本申请中，所述β-1,3葡聚糖可以显著提高盲肠内短链脂肪酸水平并改善肠道健康水平，从而宠物的免疫力延缓衰老。具体地，β-1,3葡聚糖可诱导巨噬细胞的增殖、分泌及吞噬活性，其中诱导产生的il-1(白介素-1)又可间接刺激th细胞(辅助性t细胞)分泌il-2(白介素-2)等抗癌细胞因子。上述这些细胞因子的诱发又可启动一系列生物反应，如il-1促进t、b、nk等细胞的增殖与活化，il-2诱导lak(淋巴因子激活的杀伤细胞)、til(肿瘤浸润淋巴细胞)等效应细胞杀伤致病微生物。β-1,3-葡聚糖对免疫应答反应的调控具有明显的双向性特点，即在适应剂量条件下表现为正向调节(免疫增强)，但在过量条件下则呈负向调节(免疫抑制)。

本申请中，烟酰胺单核苷酸是nad+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)合成的前体，进入细胞后通过一步代谢过程合成nad+，其可以通过促进细胞产生三磷酸腺苷(atp)，提高细胞的活力和免疫力。

可选地，所述烟酰胺单核苷酸的纯度在99％以上。所述β-1,3葡聚糖的纯度在70％以上。例如，所述β-1,3葡聚糖的纯度在70％-95％。

可选地，还包括其他活性组分，所述其他活性组分包括维生素、抗氧化剂和矿物质中的至少一种。

可选地，所述维生素包括维生素b1、维生素b2、维生素b6、维生素b12、维生素c、维生素d和维生素e中的一种或多种；所述抗氧化剂包括丁基羟基茴香醚(bha)、二丁基羟基甲苯(bht)、没食子酸丙酯(pg)、d-异抗坏血酸钠和茶多酚中的一种或多种；所述矿物质包含的矿物质元素包括镁、铁、锌、铜、钙、碘和锰中的一种或多种。

可选地，所述矿物质中，镁可以来源于硫酸镁、氯化镁和柠檬酸镁中的一种或几种；铁可以来源于葡萄酸亚铁、硫酸亚铁、乳酸亚铁、柠檬酸铁和焦磷酸铁中的一种或几种；锌可以来源于由硫酸锌、葡萄糖酸锌、乳酸锌和氯化锌中的一种或几种；铜可以来源于硫酸铜；钙可以来源于乳钙、柠檬酸钙、磷酸钙、氯化钙、碳酸钙和乳酸钙中的一种或几种；碘可以来源于碘化钾；锰可以来源于硫酸锰。

可选地，所述宠物保健品还包括填充剂、赋型剂和防腐剂中的一种或多种。可选地，所述填充剂包括植物淀粉和糊精中的一种或两种；所述赋型剂包括碳酸钙、蔗糖粉、乳糖粉和果胶中的一种或多种；所述防腐剂包括山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钙和丙酸钠中的一种或多种。

可选地，所述宠物保健品的每天用量中，所述β-1,3葡聚糖为1-1000微克/公斤体重；所述烟酰胺单核苷酸为1-2000微克/公斤体重。

本申请所述宠物保健品可以为胶囊形式，也可以为宠物饲料形式。

第二方面，本申请还提供了一种如本申请第一方面所述宠物保健品的制备方法，包括：

按配方比例称取各组分，放入搅拌锅内，经搅拌后得到混合物料；然后成型、干燥后，冷却到室温，然后容纳于包装容器并密闭，得到宠物保健品。

可选地，所述经搅拌后得到混合物料之后，所述成型之前，还包括对所述混合物料进行研磨处理。其中，所述研磨处理后的混合物料的粒径可以基于实际应用进行调整。一实施方式中，所述研磨处理后的混合物料的粒径100-2000μm。

可选地，所述包装容器可以为胶囊，所述包装容器还可以为其他形式的包装。例如，所述本申请所述宠物保健品如图1所示。

可选地，所述β-1,3葡聚糖由发酵工艺制得，具体发酵过程包括：

配制培养液，向所述培养液内接种发酵菌，于28-32℃温度下，发酵至培养液od600值大于0.6-0.9，然后分离提取β-1,3葡聚糖；所述培养液包含磷酸二氢钾(kh2po4)、硝酸钠(nano3)、硫酸镁(mgso4)、氯化钙(cacl2)、氯化亚铁(fecl2)、蔗糖和琼脂。

可选地，所述培养液中各组分的质量分数为：kh2po41‰，nano33‰，mgso40.2‰，cacl20.07‰，fecl20.0125‰，蔗糖20‰和琼脂0.9％。这里的“‰”为千分号，代表千分之几的意思。

可选地，所述培养液的ph为7.0-7.2。所述ph范围内的发酵菌活性更加突出，有利于提高发酵效率和质量。

可选地，所述发酵菌可以但不限于为土壤杆菌zx09(agrobacteriumsp.zx09)。

可续地，所述发酵过程中，对所述接种发酵菌后的培养液不断搅拌，且通入空气，其中，所述搅拌速率100-300rpm，通气量为0.3-0.5vvm。

可选地，所述发酵过程中，发酵时间可以基于所述培养液od600值进行调整。一实施方式中，发酵时间为16-30h。

进一步地，可选地，所述发酵过程中，发酵温度具体可以为30℃。

本申请中，由发酵制得的所述β-1,3葡聚糖，经分离提取后，可以获得纯度大于70％的β-1,3葡聚糖。由于传统上β-(1,3)葡聚糖的往往是从香菇、灵芝、酵母或微藻中提取获得，需要消耗大量的原材料，产率很低，纯度低，造成生产成本很高；其次，提取过程中应用大量的酸、碱和有机溶剂造成大量的废水应对环境不利。同时，酵母和微藻来源的β-(1,3)葡聚糖不是水溶性的，生物学活性低下。相比于传统β-1,3葡聚糖制备工艺，本申请中，采用上述方法制得的β-(1,3)葡聚糖，具有产量高，纯度高的特点，可以大大降低β-(1,3)葡聚糖原料成本。

可选地，所述烟酰胺单核苷酸的合成方法包括：

构建生物酶重组质粒，经蛋白表达和纯化后得到生物酶，所述生物酶包括第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和第四生物酶；所述第一生物酶包括如seqidno：1所示的核苷酸序列，所述第二生物酶包括如seqidno：2所示的核苷酸序列，所述第三生物酶包括如seqidno：3所示的核苷酸序列，所述第四生物酶包括如seqidno：4所示的核苷酸序列；

配制反应液，所述反应液包含肌苷、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷，然后向所述反应液内加入所述第一生物酶、第二生物酶和第三生物酶，经生物催化后生成5-磷酸核糖焦磷酸，然后加入烟酰胺和所述第四生物酶，经生物催化后，分离得到烟酰胺单核苷酸。

可选地，所述生物酶重组质粒使用的载体质粒为pet22b(+)。所述生物酶制备的具体过程可以为：将所述生物酶重组质粒转染至所述微生物菌株内后，在微生物培养液中诱导含有所述生物酶重组质粒的微生物菌株表达所述生物酶。所述微生物菌株包括rosetta(de3)大肠杆菌和bl21(de3)大肠杆菌中的一种或两种。进一步可选地，所述微生物菌株包括rosetta(de3)大肠杆菌。

所述生物酶可以在所述微生物菌株的胞内生成，也可以由所述微生物菌株的胞内生成后在释放在所述微生物培养液中。通过对所述能够表达生物酶的微生物菌株进行收集、清洗、破胞后收集得到所述粗酶液，所述粗酶液中包含有生物酶。然后经后续的蛋白纯化过程后，得到所述生物酶。一实施方式中，可以通过镍柱纯化获得纯化所述生物酶蛋白。

可选地，所述第一生物酶包括如seqidno：5所示的氨基酸序列。所述第二生物酶包括如seqidno：6所示的氨基酸序列。所述第三生物酶包括如seqidno：7所示的氨基酸序列。所述第一生物酶包括如seqidno：8所示的氨基酸序列。

可选地，所述生物酶包括第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和第四生物酶的编码基因应该考虑简并碱基。以第一生物酶为例，如seqidno:5所示的氨基酸序列的编码基因包括如seqidno:1所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与seqidno:1具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为seqidno:5。

所述生物酶的编码基因可以插入到载体质粒的多克隆位点中，例如bamhⅰ、ecorⅰ或xhoⅰ的酶切位点之间。所述生物酶的编码基因插入到pet22b(+)载体质粒时，所述生物酶的编码基因的5’端可加入起始密码子(如atg)；3’端可加入终止密码子(如taa)。一实施方式中，所述生物酶的编码基因可以插入到载体质粒的“catatg”和“ctcgag”的酶切位点之间。

可选地，所述反应液还包括碳酸钠、氯化镁和氯化钾。本申请所述反应液中的碳酸钠、氯化镁和氯化钾能用于辅助酶催化反应，提高生物酶的活性。

本申请通过采用生物酶催化合成的烟酰胺单核苷酸，产率高，纯度高；可以大大节约成本；制备得到的烟酰胺单核苷酸的纯度可以达到99％以上。

本申请的有益效果包括以下几个方面：

1、本申请所述宠物保健品，能够有效维持肠道健康，宠物保健品中的β-1,3葡聚糖和烟酰胺单核苷酸发挥协同作用，β-1,3葡聚糖可以显著提高盲肠内短链脂肪酸水平并改善肠道健康水平，从而宠物的免疫力延缓衰老；烟酰胺单核苷酸为细胞提供能量源atp，增强代谢和细胞更新，有利于进一步促进葡聚糖的吸收和功能的实施；烟酰胺单核苷酸自身也有延缓衰老的功能，搭配葡聚糖后功能提升；使整个宠物保健品可以表现出更突出的抗衰老功效。

2、本申请所述宠物保健品的制备方法，工艺简单，绿色环保，可以广泛适用于工业化规模生产；且原料中β-1,3葡聚和烟酰胺单核苷酸制备成本低，纯度高，可以进一步降低宠物保健品的生产成本，同时提升宠物保健品的抗衰老功效。

本申请的优点将会在下面的说明书中部分阐明，一部分根据说明书是显而易见的，或者可以通过本申请实施例的实施而获知。

附图说明

为更清楚地阐述本申请的内容，下面结合附图与具体实施例来对其进行详细说明。

图1为本申请一实施方式提供的宠物保健品示意图；

图2为本申请一实施方式提供的第一生物酶的sds-page图；

图3为本申请一实施方式提供的第二生物酶的sds-page图；

图4为本申请一实施方式提供的第三生物酶的sds-page图；

图5为本申请一实施方式提供的第四生物酶的sds-page图；

图6为本申请一实施方式提供的烟酰胺单核苷酸的具体生物酶催化工艺途径图。

具体实施方式

以下所述是本申请实施例的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请实施例原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本申请实施例的保护范围。

若无特别说明，本申请实施例所采用的原料及其它化学试剂皆为市售商品。

(1)β-1,3葡聚糖的制备

采用发酵法制备得到β-1,3葡聚糖，具体过程包括：配制培养液，向所述培养液中接种发酵菌zx09，其中，所述培养液为kh2po41‰，nano33‰，mgso40.2‰，cacl20.07‰，fecl20.0125‰，蔗糖20‰，琼脂0.9％，所述培养液的ph为7.0-7.2；于发酵罐中30℃发酵，搅拌速率200rpm，通气量0.4vvm，发酵1天，至培养液的od600值大于0.9；分离提取制备得到的β-1,3葡聚糖。其中，提取的β-1,3葡聚糖的纯度大于70％。

(2)烟酰胺单核苷酸的制备

(a)构建pet22b(+)-nmn重组质粒

全基因合成生物酶的基因序列，生物酶包括第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和第四生物酶，其基因序列分别如seqidno：1-seqidno：4所示的核苷酸序列，分别对应构建到质粒pet22b(+)上，所述核苷酸序列的生物酶基因插入到载体质粒中ndei和xhoi酶切位点之间；所述生物酶基因插入到载体质粒时，所述生物酶基因编码序列的3’端可加入终止密码子(如taa)与载体质粒中xhoi酶切位点相连。

(b)生物酶表达

将含有重组质粒pet22b(+)-nmn的大肠杆菌以1％的接种量接种至含有10ml的lb培养基(100μg/ml氨苄青霉素(amp))的50ml三角瓶中，维持恒定的37℃，200rpm的摇晃速率，过夜培养后，将菌液以1％的接种量转接到含有1l的lb培养基(100μg/mlamp)的2l三角瓶中，继续37℃恒温培养至培养基中的od600值达到0.6左右，加入异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(iptg)诱导剂(体系终浓度0.5mm)，在37℃条件培养8小时后离心收集菌体。将菌体分别用4倍质量的100mm的磷酸钾缓冲液(ph＝6.5)进行重悬并超声破碎20min，得到nmn合成生物酶粗酶液。

将表达获得的nmn生物酶粗酶液进行蛋白纯化。例如通过镍柱分离纯化方法对获得的各种生物酶进行纯化，利用不同浓度的咪唑进行洗脱；然后进行sds-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds-page)鉴定，参见图2-图5。其中，第一生物酶、第二生物酶、第三生物酶和第四生物酶的分子量分别约为32kda、32kda、21kda和58kda。将通过镍柱纯化获得上述生物酶蛋白保存备用。

(c)烟酰胺单核苷酸的催化合成

配制反应液，以肌苷、二磷酸腺苷、三磷酸腺苷和烟酰胺为原料，碳酸钠、氯化镁和氯化钾为辅料，在生物酶的催化作用下制得所述烟酰胺单核苷酸，其合成途径如图6所示，其中，反应液中的肌苷在第一生物酶的催化下生成1-磷酸核糖，然后1-磷酸核糖、二磷酸腺苷和三磷酸腺苷在第二生物酶和第三生物酶的催化下生成5-磷酸核糖焦磷酸。得到的5-磷酸核糖焦磷酸和加入的烟酰胺，在第四生物酶的催化下生成烟酰胺单核苷酸，然后分离提取得到烟酰胺单核苷酸。所述烟酰胺单核苷酸的纯度可以达到99％以上。

实施例1

一种宠物保健品的制备方法，包括以下步骤：

将由上述制备方法制得的β-1,3葡聚糖5mg、烟酰胺单核苷酸10mg和维生素c3mg混合均匀后，灌装胶囊，得到宠物保健品。

实施例2

一种宠物保健品的制备方法，包括以下步骤：

将由上述制备方法制得的β-1,3葡聚糖5mg、烟酰胺单核苷酸10mg和抗氧化剂d-异抗坏血酸钠0.5mg混合均匀后，灌装胶囊，得到宠物保健品。

实施例3

一种宠物保健品的制备方法，包括以下步骤：

将由上述制备方法制得的β-1,3葡聚糖5mg、烟酰胺单核苷酸10mg和矿物质0.2mg混合均匀后，灌装胶囊，得到宠物保健品。

效果实施例

(1)宠物保健品对犬血清抗氧化酶活性的调控及对氧化损伤的缓解作用

材料与方法：选择成年犬(年龄大于5岁)40只，随机分成5个处理组，每个组10只，各组犬平均年龄和体重接近30-35kg。5个处理组：(1)对照组1：正常犬粮；(2)对照组2：正常犬粮和β-1,3葡聚糖；(3)对照组3：正常犬粮和烟酰胺单核苷酸。保健品灌胃给药30天和60天，具体参见表1。前肢静脉采血，离心制备血清；(4)实验组1：正常犬粮和宠物保健品；(5)实验组2：正常犬粮和高含量宠物保健品。血清抗氧化指标测定包括：谷胱甘肽过氧化酶(gsh-px)，超氧化物岐化酶(sod)活性以及丙二醛(mda)含量。

其中，数据统计与分析：使用spss2.0统计软件进行单因素方差分析，并采用duncan进行多重比较，p<0.05表示差异显著，结果参见表2。

表1不同处理组宠物保健品的各组分饲喂量(mg/kgbw)

表2宠物保健品对犬血清抗氧化酶活性及mda含量的影响

注：同一行肩标字母不同者(a、b、c)表明差异显著(p<0.05)。

由表2数据可以看出，实验组1-2的犬血清中gsh-px和sod酶的活性显著高于对照组1-3(p<0.05)，并且，对照组1和对照组3的犬血清gsh-px和sod酶的活性接近，表明烟酰胺单核苷酸对gsh-px和sod酶的活性效果并不显著；而对照组2中的β-1,3葡聚糖对gsh-px和sod酶的活性提升效果也有限，明显低于实验组1和2(p<0.05)，并且饲喂30天和60天的结果趋势相同。同时实验组1-3的犬血清中mda含量显著低于实验组1和2(p<0.05)，而且，实验组1和2的犬血清mda含量也显著低于对照组2和3(p<0.05)，饲喂30天和60天的呈现的结果趋势相同。本实施方式的实验组1和2中，所述宠物保健品饲喂30天以上的可以显著提高犬血清中抗氧化酶的活性，降低血液中脂质过氧化物的含量。本实施方式中，所述宠物保健品同时含有β-1,3葡聚糖和烟酰胺单核苷酸，可以进一步提高犬血清中抗氧化酶的活性，进一步降低血液中脂质过氧化物的含量，各组分之间具有协同作用，可以显著提高犬的抗氧化能力。

由表2数据可以看出，与对照组1相比，对照组2犬血清中gsh-px和sod酶的活性有一定程度地升高，mda含量降低(p<0.05)，而核苷酸组犬血清中gsh-px、sod酶活性以及mda含量均无显著变化，30天和60天的结果一致，表明单独饲喂β-1,3葡聚糖具有一定抗氧化作用，而单独饲喂烟酰胺单核苷酸无显著抗氧化作用。但实验组1犬血清中gsh-px和sod酶的活性显著高于对照组2，mda含量显著低于对照组2(p<0.05)，表明本申请实验组1的宠物保健品中β-1,3葡聚糖和烟酰胺单核苷酸具有协同作用，可大幅度提高犬的抗氧化能力。提升添加的宠物保健品剂量作为实验组2时，也可以同样显著提高犬的抗氧化能力，但与实验组1相比无显著差异，表明本申请所选剂量范围下的宠物保健品均可改善犬的抗氧化能力。

本实施方式的实验组1和实验组2中，所述宠物保健品饲喂30天以上的可以显著提高犬血清中抗氧化酶的活性，降低血液中脂质过氧化物的含量。本实施方式中，所述宠物保健品同时含有β-1,3葡聚糖和烟酰胺单核苷酸，可以进一步提高犬血清中抗氧化酶的活性，进一步降低血液中脂质过氧化物的含量，各组分之间具有协同作用，可以显著提高犬的抗氧化能力。本申请所述宠物保健品还可以添加维生素、抗氧化剂和矿物质中的至少一种组分。

本申请所述宠物保健品组合物，能够有效维持肠道健康，宠物保健品中的β-1,3葡聚糖和烟酰胺单核苷酸发挥协同作用，β-1,3葡聚糖可以显著提高抗氧化指标，从而提高宠物的免疫力延缓衰老；烟酰胺单核苷酸为细胞提供能量源atp，增强代谢和细胞更新，有利于进一步促进葡聚糖的吸收和功能的实施；烟酰胺单核苷酸自身也有延缓衰老的功能，搭配葡聚糖后功能提升；使整个宠物保健品可以表现出更突出的抗衰老功效。

以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110>张琦

李成武

姬丽华

<120>一种宠物保健品及其制备方法

<160>8

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>882

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>1

caccaccatcatcaccacgcgaacggctacacctacgaagactaccaagatacggccaaa60

tggctgctgagccataccgaacagcgcccacaagttgcggttatctgtggcagcggtctg120

ggtggtctggttaataaactgacgcaagcccagacgttcgactacagcgagatcccgaac180

tttccggaaagcaccgttccgggccatgccggtcgcctcgttttcggcattctgaacggc240

cgtgcgtgcgttatgatgcaaggccgctttcacatgtacgaaggctacccgttctggaag300

gttacctttccggtgcgcgttttccgtctgctgggtgtggaaacgctggttgttaccaat360

gcggccggtggtctgaatccgaactttgaagtgggcgacatcatgctgatccgcgaccac420

atcaatctgccgggtttcagcggcgaaaatccgctgcgcggtccgaatgaagaacgcttt480

ggcgtgcgctttccggccatgagcgatgcgtacgatcgcgatatgcgccagaaagcgcac540

agcacgtggaaacagatgggtgaacagcgcgaactgcaagaaggtacctacgttatgctg600

ggcggcccgaacttcgaaaccgtggccgaatgccgtctgctgcgcaatctgggcgcggat660

gccgtgggtatgagcaccgttccggaagtgattgttgcccgccattgcggtctgcgcgtg720

tttggcttcagtctgatcaccaacaaggtgatcatggactacgagagccaaggcaaagcg780

aaccacgaagaagttctcgaagcgggcaaacaagccgcccagaagctggaacagttcgtt840

agtctgctgatggccagtattccggtgagcggccataccggc882

<210>2

<211>897

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>2

caccaccaccaccatcacaaactggatgtgatcggcatcggcaatctgaactacgacatc60

atcttcacgctggaacgctttccggagttccacgaaaagatcaacgcccgcggtgcccat120

tttggtctcggtggtgcggcggccaataccattagctggctggcgcacttcggtctgaaa180

acgggctacatcggcgccgtgggcaatgatgacgtgggcgagatgcacatcaagtacttc240

caaggcatcggcgttgataccggcggcatcgatgttgttgaggaaccgagcggtgttgcg300

gttgccatggttgcgggcgacgataagcgcatcgttaaatacccgggtgccaatctgcgc360

cgccgcttcaaaccggaatacgccagccgcgcgaaatttctgcatctgagcagcaacccg420

ccagaactgatcgaagaggccgtgaacttcgcgagtcaacgcggcatcaaagtgagcctc480

gatatcggtgaagcgccgctgccacgcgaactggaaagcaaggtggactacctcatgatg540

aacgaggacgagtatcgccgcaaatacggtagtctggatccgagtctgtgccgcgccaaa600

aatctggtggtgacgctgaatggcggtggtgcgctggttcgcgaaggcgataacgttttc660

gaggtgcgtggtctgagcgccaaagtggttgatagtacgggcgccggtgatagcttcgat720

gccggtgttatctacggcgttctgaacggttggagtctgctggatagcgccaaactgggc780

atgctgctggcctatctgaccgttcagaaagttggtgcccgcagcgccatcgttccgctg840

gaagaggttaaacgcatcgcccgcgaggttggtctcgatctcccattcaatcgcacc897

<210>3

<211>570

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>3

atgggcaaactgatctggctgatgggtccaagcggcagcggcaaagatagtctgctggcg60

gaactgcgtctgcgcgaacaaacccagctgctggttgcccaccgctacatcacccgtgat120

gccagcgccggcagtgaaaaccacatcgcgctgagcgagcaagaattcttcacccgtgcc180

ggccagaatctgctggcgctgagctggcacgcgaatggtctgtactacggcgtgggcgtt240

gagattgatctgtggctgcacgccggctttgatgttctggtgaatggcagtcgtgcccat300

ctgccacaagcccgtgcccgttatcagagcgcgctgctgccggtttgtctgcaagttagc360

ccggaaattctgcgccagcgtctggaaaatcgcggccgcgaaaatgcgagcgaaatcaat420

gcgcgtctggcccgtgccgcgcgttataccccacaagattgccacacgctgaacaacgat480

ggcagtctgcgccagagcgtggatacgctgctgacgctgatccaccagaaagagaaacac540

cacgcgtgtctgcatcaccatcatcatcat570

<210>4

<211>1629

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>4

gccgccgaacaagatccagaagcgcgtgccgcggcgcgtccactgctgaccgatctgtac60

caagcgaccatggcgctgggttattggcgtgccggtcgtgcgcgtgatgccgccgaattt120

gagctgttctttcgccgttgcccatttggtggtgcctttgcgctggcggcgggtctccgc180

gattgcgttcgttttctgcgtgcgttccgtctgcgcgatgcggatgttcagtttctggcg240

agtgttctgccaccagataccgacccggccttttttgagcatctgcgcgcgctggattgc300

agtgaggttaccgttcgcgcgctgccggaaggtagtctcgcctttccgggcgtgccgctg360

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