动物模型与评估丨啮齿动物交配行为实验相关整理总结
雌鼠交配实验前准备
每只雌鼠测试52h之前皮下注射2mg/mL苯甲酸雌二醇30μg，4~6h前皮下注射10mg/mL黄体酮500μg，促进雌鼠发情（苯甲酸雌二醇和黄体酮注射液用花生油稀释，水浴加热1h混匀后备用）。
实验于16：00开始进行，室内环境为安静，暗光观察，将雄鼠放入透明实验大鼠笼中适应5min后再放入发情雌鼠，观察交配行为，30min/次，在30min内如果出现1次插入行为即可停止实验，1周2~3次，进行4次训练，共有3次有插入行为的大鼠入选。
动物分组：雄性大鼠随机分为低、中、高浓度乙醇组和对照组，实验组大鼠灌胃乙醇的浓度分别为25.6%，34.2%和51.3%（V/V），按照10ml/kg一次性灌胃，对照组大鼠给予同等剂量生理盐水一次性灌胃。实验前12h禁食，不禁饮。
发情雌鼠模型的制作
雌性Wistar大鼠，10%水合氯醛（4mg/kg）麻醉后，沿下腹部正中线打开腹腔，可见乳白色脂肪组织，分离后找到粉红色绿豆大小的卵巢。完整摘除双侧卵巢，结扎输卵管、血管，分层缝合腹膜、肌肉和皮肤。术后连续3d肌内注射青霉素2万U/kg，预防感染。卵巢切除术后2周用于交配实验。实验前48h在雌鼠颈部皮下注射苯甲酸雌二醇，实验前4h注射黄体酮建立发情雌鼠动物模型备用。发情雌鼠会出现跳跃行为和双耳高频率颤动等行为，提示造模成功。
交配行为实验：
实验于16：00开始进行，室内环境为安静，暗光观察，将雄鼠放入透明实验大鼠笼中适应5min后再放入发情雌鼠，观察交配行为，30min/次。
非接触性阴茎勃起实验：实验于16：00开始，将发情雌鼠提前30min单独放于金属丝笼中，将雄鼠单独放于另一金属丝笼中并紧贴雌鼠笼适应5min后观察30min。室内环境为安静暗光，记录雄鼠阴茎勃起次数。
先把一只实验组或对照组雄鼠放人观察笼中适应环境10min，然后放1只发情雌鼠。观察15min，分别记录以下指标：①骑跨次数，自雌鼠放入笼中后，雄鼠出现骑跨行为的次数。②插入次数：合笼后，雄鼠出现插入行为的次数。③骑跨潜伏期自雌鼠放入笼中至雄鼠发生第一次骑跨行为所需时间。④插入潜伏期，自雌鼠放入笼中至雄鼠发生第一次插入行为所需时间。
交配选择实验：
在实验前两个星期，将实验的小鼠进行隔离，将其单独饲养在一个与外界其它小鼠无接触的封闭的笼子中。笼中的垫料至少４天不进行更换。实验选在黑暗的时间段里。放入的小鼠为两只入侵者小鼠，作者选择为一只８周的雄性小鼠，和一只８周的雌性小鼠。入侵者小鼠都应群居饲养。因两只入侵者小鼠都是C57BL6／J，外形接近，故将雄性入侵者的小鼠尾部的毛部分剪掉，将雌性入侵者的小鼠颈部的毛部分剪掉，以方便进行区分。实验时，将作为入侵者的小鼠放入实验小鼠的笼内，用红外摄像机将它们的所有行为都录下来，共记录30分钟。分析时，观看所记录的视频文件，记录实验小鼠对两只视鼠的所有的交配行为，包括骑乘动作、交配动作等。将从放入入侵鼠到实验室最先开始出现有交配行为的时间间隔记录为潜伏期，单位为秒。另外记录在30分钟内实验小鼠出现交配行为的总次数以及30分钟内实验小鼠进行交配行为持续的总时间。
测试指标如下：
①爬垮次数；②射精次数；③爬垮潜伏期；④射精间歇时间；⑤插入次数；⑥插入潜伏期
注意事项：
大鼠的交配行为很容易受到周围环境，诸如较强的光线、人的存在、声音等因素的影响。因此，在实验中，采取先录像然后反复观看录像纪录数据的方法。本实验中行为学观察需在较暗光线及安静环境中进行，故实验均在晚6时至晚12时完成。
文献引用： 1.Werneke U,Northey S,Bhugra D.Antidepressants and sexual dysfunction.Acta Psychiatr Scand,2006,114(6):384-3972.芦晔,裴林,关振伟,等.化浊解毒疏肝方对慢性应激小鼠的抗抑郁作用及对BDNF-Rac1-cofilin通路的影响.中华中医药杂志,2019,34(5):2089-20933.J SRS,E S L,Sharon R-L.A novel approach for predicting antidepressant-induced sexual dysfunction in rats.Psychopharmacology,2008,195(4):459-4674.Gregorian R S,Golden K A,Bahce A,et al.Antidepressant-induced sexual dysfunction.Ann Pharmacother,2002,36(10):1577-15895.Genetic Factors in Alcohol Metabolism and Alcoholism[J]. W. Bosron;;T. Ehrig;;T.-K. Li.Semin Liver Dis,1993(02)6.李鑫,王亚南,程秀臻.乙醇对雄性大鼠交配行为的影响及其机制研究[J].潍坊医学院学报,2009,31(01):13-15.相关知识
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